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Alt-R CRISPR-CAS9系统： - 核糖核蛋白的输送...
*我们保证，使用Alt-R-R Crispr-Cas9指南RNA（CRRNA：TRACRRNA DUPLEX或SGRNA）和Alt-R S.P.cas9核酸酶或Alt-R S.P.HIFI Cas9核酸酶。 编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。 如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。 此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。HIFI Cas9核酸酶。编辑分析必须在DNA水平上，例如使用Alt-R基因组编辑检测试剂盒或DNA测序。如果未在成功的指导RNA中观察到成功的编辑，而在适当的阳性控制成功的同时，将批准对先前设计的ALT-R CRISPR-CAS9指南RNA进行一次“无成本”替换。此保证不会扩展到任何替代产品，或任何其他发生或附带费用或费用。
通过将核糖核蛋白电穿孔到Zona-Intact牛胚胎
体细胞核转移或细胞质显微注射已用于产生基因组编辑的农场动物。但是，这些方法具有降低其效率的几个缺点。这项研究旨在开发电穿孔条件，使CRISPR/CAS9系统的传递到牛为有效的基因敲除。我们优化了电穿孔条件，以传递CAS9：SGRNA核糖核蛋白到牛合子，而不会损害胚胎发育。较高的电穿孔脉冲电压导致膜渗透性增加。但是，高于15 v/mm的电压降低了胚胎发育潜力。牛胚胎的Zona卵石不是有效的RNP电穿孔的障碍。使用针对最大膜通透性进行优化的参数，同时我们在靶向牛OCT4时达到了高基因编辑的速率，这导致100％评估的胚胎和预期在莫拉拉阶段对胚胎发育的预期停滞的100％蛋白质。总而言之，CAS9：SGRNA核糖核蛋白可以通过电穿孔到Zona-Intact牛合子的能力递送，从而导致有效的基因敲除。
核糖核酸酶A（rnase a）（冻干形式）
RNase A是一种用于分子生物学应用的牛胰腺内切核酸酶。RNase A的主要应用是从制备质粒DNA以及提取质粒DNA中去除RNA。它也用于去除非特异性结合的RNA； RNase保护分析； RNA序列的分析以及蛋白质样品中包含的RNA的水解。rNase A在嘧啶核苷酸的3¢磷酸盐处攻击。PG-PG-PC-PA-PG的序列将被裂解以得到PG-PG-PCP和A-PG。最高的活性用单链RNA表现出来。RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。 rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制，这些烷基化存在于酶的活跃部位中。 RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制，这些烷基化存在于酶的活跃部位中。RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A的活化剂包括钾和钠盐。Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质
聚（ADP-核糖）聚合酶-1（PARP-1）抑制
ETS 转录因子是一个蛋白质家族，由一组在从后生动物到人类的进化过程中保守的基因编码 [1,2]。迄今为止，已在脊椎动物中描述了该家族的 28 个成员，分为 12 组 [3]。这些转录因子的特点是具有一个高度保守的有翼螺旋-转角-螺旋 DNA 结合域 (DBD)，该域可识别位于靶基因启动子中的具有中央 5′-GGA(A/T)-3′ 核心的特定 DNA 元素，称为 ETS 结合位点 (EBS)。尽管所有 ETS 家族成员都共享相同的 DBD，但每个 ETS 转录因子都有自己的 DNA 结合特性，这些特性受到严格控制以确保特定的生物学作用。具体而言，ETS 转录因子的 DNA 结合特性可通过以下方式彼此区分：(i) EBS 序列识别的细微差异 [4]、(ii) 与不同结合伙伴的特异性相互作用，或 (iii) 调节其对 DNA 亲和力的差异性翻译后修饰 [3]。尽管如此，ETS 转录因子在许多细胞类型（例如造血细胞、乳腺和前列腺组织）中广泛共表达，并且这些细胞中每种因子的生物学特异性仍不清楚 [3]。
重组人核糖核酸酶抑制剂（RNH1）
序列 SLDIQSLDIQCEELSDARWAELLPLLQQCQVVRLDDCGLTEARCKDISSALRVN PALAELNLRSNELGDVGVHCVLQGLQTPSCKIQKLSLQNCCLTGAGCGVLSST LRTLPTLQELHLSDNLLGDAGLQLLCEGLLDPQCRLEKLQLEYCSLSAASCEPL ASVLRAKPDFKELTVSNNDINEAGVRVLCQGLKDSPCQLEALKLESCGVTSDN CRDLCGIVASKASLRELALGSNKLGDVGMAELCPGLLHPSSRLRTLWIWECGI TAKGCGDLCRVLRAKESLKELSLAGNELGDEGARLLCETLLEPGCQLESLWVK SCSFTAACCSHFSSVLAQNRFLLELQISNNRLEDAGVRELCQGLGQPGSVLRV LWLADCDVSDSSCSSLAATLLANHSLRELDLSNNCLGDAGILQLVESVRQPGC LLEQLVLYDIYWSEEMEDRLQALEKDKPSLRVIS
核糖核苷酸还原酶，淋病的新药物
抽象抗生素耐药酸酯（NG）是由于增加的多药耐药性（MDR）生物的增加而成为新兴的公共卫生威胁。我们确定了两个新型的口服活性抑制剂PTC-847和PTC-672，它们表现出狭窄的活性范围，包括NG，包括MDR分离株。通过选择对新型抑制剂有抗性的生物并测序其基因组，我们确定了一个新的治疗靶标，即IA核糖核苷酸还原酶（RNR）。在Ng MAP中分解突变与α亚基的N末端锥结构域，我们在这里显示的是在存在β亚基和变构效应子DatP的情况下形成抑制的α4β4状态。 酶测定确认PTC-847和PTC-672抑制NG RNR，并揭示了变构效应器DATP增强了抑制作用。 口服PTC-672的口服降低了小鼠模型中的NG感染，并且可能具有治疗对当前药物具有抗药性的治疗的治疗潜力。分解突变与α亚基的N末端锥结构域，我们在这里显示的是在存在β亚基和变构效应子DatP的情况下形成抑制的α4β4状态。酶测定确认PTC-847和PTC-672抑制NG RNR，并揭示了变构效应器DATP增强了抑制作用。口服PTC-672的口服降低了小鼠模型中的NG感染，并且可能具有治疗对当前药物具有抗药性的治疗的治疗潜力。口服PTC-672的口服降低了小鼠模型中的NG感染，并且可能具有治疗对当前药物具有抗药性的治疗的治疗潜力。
HFPEF中的线粒体生物能和D-核糖
心脏病是一种常见的疾病，在美国（美国）和全球范围内一直是死亡率的主要原因，在美国每4例死亡中，有1个死亡人数，占世界总死亡人数的16％（1,2）。随着每年65岁及65岁以上的全球人口的增加，心脏病的患病率也在增加（3）。在患有心脏病，心力衰竭，严重状况的患者中，遭受了超过620万美国成年人的困扰，占每年死亡的13.4％，超过一半的心脏病归因于死亡（4）。到2030年，估计心力衰竭的美国成年人数量将增加到超过800万或人口的3％（4）。心力衰竭发展的总体终生风险从95岁时的20％到45％到45％，性别和种族之间的差异。在患有升高的血压和体重指数等危险因素的人群中，终生风险也有显着增加（4）。
CRISPR 核糖核蛋白介导的植物基因工程
CRISPR 衍生的生物技术彻底改变了基因工程领域，并已广泛应用于基础植物研究和作物改良。常用的农杆菌或粒子轰击介导的转化方法用于传递质粒编码的 CRISPR 试剂，可导致外源重组 DNA 的整合和潜在的脱靶诱变。编辑效率也高度依赖于表达盒及其基因组插入位点的设计。使用 CRISPR 核糖核蛋白 (RNP) 进行基因工程已成为一种有吸引力的方法，具有许多优势：无 DNA/转基因编辑、最小的脱靶效应、由于 RNP 快速降解而降低毒性以及能够在保持高编辑效率的同时滴定其剂量。尽管 RNP 介导的基因工程已在许多植物物种中得到证实，但其编辑效率仍然不高，并且由于植物再生和选择的困难，其在许多物种中的应用受到限制。在这篇综述中，我们总结了 RNP 介导的植物基因工程的当前发展和挑战，并提供了未来的研究方向，以扩大该技术的使用。
基于支架的 CRISPR/Cas9 核糖核蛋白递送……
Chooi, W. H.、Chin, J. S. 和 Chew, S. Y. (2021)。基于支架的 CRISPR/Cas9 核糖核蛋白递送用于基因组编辑。分子生物学方法，2211，183-191。doi:10.1007/978-1-0716-0943-9_13