Ilham Y. Abdi 1.2†,Indulekha P. Sudhakaran 17,18,Vasilies 3.4,Elisabeth Kapaki 3.4,George Houlden 16,Laura Parkkinen 10,Wilma D.J.去Berg 11,Michael G.agnaf 1.2 *
。cc-by 4.0国际许可证(未经同行评审证明)获得的是作者/资助者,他已授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。是
此预印本的版权所有者于 2025 年 2 月 14 日发布此版本。;https://doi.org/10.1101/2025.02.07.25321793 doi: medRxiv preprint
图 1 布氏锥虫 PCF 中的 GFP 失活。(a)对组成性表达胞浆 eGFP 的布氏锥虫进行荧光流式细胞术分析。在用 20 μ g(无 Cas9、Cas9/gRNA GFP1、Cas9/gRNA GFP2、Cas9/gRNA GFP3)或 60 μ g(Cas9/gRNA GFP2)来自 IDT 的 RNP 复合物转染后 24 至 72 小时随时间监测 GFP 荧光,条形图显示用不同向导转染后 72 小时 GFP 阴性细胞的百分比(n = 3)。采用 Prism 软件进行统计分析,采用 t 检验(非配对、正态分布、参数检验和双尾)。显着性水平(p 值)用星号表示。 (b)上图显示了允许 e Sp Cas9 在大肠杆菌中表达的质粒的示意图。蓝色框表示蛋白质 N 端和 C 端的两个多组氨酸序列,红色框表示 TEV 和肠激酶 (EK) 蛋白酶的切割位点,灰色框表示三个核定位信号 (NLS),黑色框表示 FLAG 表位的三个重复,橙色框表示 e Sp Cas9 编码序列。下图显示了在用来自 IDT 或实验室纯化 (Lab) 的 RNPs 复合物 (无 Cas9、20 μ g Cas9/gRNA GFP2、40 μ g Cas9/gRNA GFP2、40、60 和 80 μ g Cas9/gRNA GFP2) 转染后 72 小时监测的表达 GFP 的 T. brucei 的荧光流式细胞术分析。(c)不再表达 GFP 的克隆中 GFP 基因的一部分的序列比较。该序列仅显示 GFP2 向导 RNA 所针对的区域。灰色框(H1 和 H2)突出显示可能用于 MMEJ 修复的同源区域。由实验室纯化的 Cas9 失活产生的序列和来自商业 Cas9 的序列分别标记为 Lab 和 IDT。下面显示了 Dc6 和 Ba10 克隆的相应色谱图(置信区间 95%— p 值样式:0.1234 (ns);0.0332 (*);0.0021 (**);0.0002 (***);< 0.0001 (****))。
Philippe E Mangeot,Laura Guiguettaz,Thibault J M Sohier,Emiliano P Ricci。通过病毒样颗粒(“纳米薄片”)在永生和原代细胞中递送Cas9/sgrna核糖核蛋白复合物。可视化实验杂志:Jove,2021,169,10.3791/62245。hal-04892096
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多巴胺能神经元细胞死亡,与细胞内-突触核蛋白( -syn) - 富含蛋白质聚集体[称为“ Lewy Bodies”(LBS)],是帕金森氏病(PD)的良好特征。从多个实验模型中获得的许多证据表明, -syn在PD发病机理中发挥了作用,不仅是病理学的触发因素,而且是通过病理扩散的疾病进展的介体。在这里,我们使用了一种基于机器学习的方法来识别由来自PD患者衍生的不同 -Syn致病结构引起的猴子中神经退行性的独特特征。出乎意料的是,我们的结果表明,在非人类灵长类动物中,少量的奇异 - syn聚集体与LBS中存在的较大的淀粉样蛋白原纤维一样有毒,从而增强了该物种中临床前研究的需求。此外,我们的结果提供了支持PD的真实多因素性质的证据,因为多种原因可以引起多巴胺能神经变性的类似结果。
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