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38在γ-突触核蛋白中发现了两名肌萎缩症患者...
了解突触核素蛋白在体外和细胞中如何形成淀粉样蛋白如何对了解疾病至关重要。先前的研究表明，α-突触核蛋白的P1区（残基36-42）控制淀粉样蛋白的形成。我们在这里报告了在两个患有肌萎缩性侧面硬化症的个体中发现的γ-突触蛋白（γSyn）（Met38至Ile）的P1区域中的单个核苷酸多态性。两个个体在同一基因（glu110 to val）中都有第二个多态性，通常在普通人群中发现。我们表明，ILE38-含有γ静态形式的淀粉样蛋白在体外快速淀粉样蛋白，而Met38并未聚集成淀粉样蛋白，而Val110具有保护性，从而减慢了聚集。结果突出了P1序列在蛋白质淀粉样蛋白倾向之间平衡的关键作用。
用于高度特异性检测α-突触核蛋白有毒低聚物
神经退行性疾病是全球残疾的主要原因，帕金森氏病（PD）是增长最快的神经系统疾病。在2019年，全球估计表明，有超过850万人患有PD的人。与衰老紧密相连，预计到2040年将翻一番，对整个公共卫生系统和社会造成了很大的压力（https://www.who.int/news-news-roos-rooo m/fact-seets/fact-sheets/fact-sheets/delets/parkinson-disease）。迄今为止，没有血液检查，脑扫描或其他测定方法可以用作PD的确定诊断测试，目前的诊断方法主要依赖于运动症状和神经影像学的专家临床评估[1]。不幸的是，到诊断时，该疾病已经发展到一个相对先进的阶段，在本质中，大约60％的多巴胺能神经元在不可逆地丢失。在此阶段，延迟疾病进展可能为时已晚。因此，迫切需要在早期阶段检测PD的正交分子诊断方法。pd在病理上以蛋白质聚集体在受影响的神经元中的积累，主要由α-突触核蛋白（αS）组成[2，3]。αS的低聚物，而不是神经淀粉样蛋白包含物，被认为是毒性获得的实际致病罪魁祸首，改变了细胞骨架结构，膜通透性，膜流入，钙涌入，活性氧，活性氧，突触触发和神经元兴奋性[4，5]。这导致了与可溶性单体αs不良的交叉反应，这在CSF中的确更为丰富[4，14，15]。有证据表明，与非PD对照相比，PD患者的脑脊液（CSF）中αS低聚物的升高升高，表明它们在该生物FLUID中的水平可以用作PD的生物标志物，为诊断提供了机会[6-8]。然而，我们缺乏对αs低聚物结构的知识，以及它们的短暂性，异位和动态性质，使他们的跟踪和定量成为一项具有挑战性的任务。αs的抗体的产生和使用已成为首选选项，作为诊断和治疗目的的特定元素，例如抑制蛋白质聚集[9]。因此，在早期研究中，CSF中的αS聚集体和其他生物学流体（如血浆或血清）的检测依赖于诸如ELISA [10-12]或CLIA [13]等免疫测定的检测，其抗体通常针对αs s s s s s s s s s s s s s s s s s s s s。因此，这种方法显示出很大的可变性和有限的可靠性[16]。还采用了一些其他已建立的技术来检测有毒的低聚物，例如免疫组织化学，接近连接测定，基于Luminex的测定法，这也需要抗体[17，18]。同样，最近的策略同样依赖于将可用的抗体纳入具有不同感应构型（光学，电化学等）的不同生物传感器原型中。所有这些最终都可能遭受与使用这些受体相同的缺点。基于DNA的适体[19]最近为αs的低聚形式产生了另一种生物受体[20]，尽管它们也显示出对Aβ1-40低聚物的识别。超敏感蛋白扩增测定法的最新进展，例如蛋白质不满意的环状扩增（PMCA）和实时Qua King诱导的转化率（RT-QUIC），该转化率（RT-QUIC）最初是针对人类疾病疾病的诊断，已显示出可吸引蛋白质聚集的有希望的结果，该蛋白质与患者的识别和分流相关[7] [7] [7] [7] [7]。但是，它们在常规DI不可知论中的临床实施中也表现出重大局限性。首先，不可能知道哪种是在反应中放大的特定αS物种，因此，分子生物标志物在
CRISPR/CAS9核糖核蛋白介导的HTERT-RPE1细胞中的敲除蛋白
图1。使用ssDNA或PCR产物作为HDR模板（a）上部的蛋白质标记的策略示例：据报道编码Centriolar远端附属物蛋白SCLT1的C-末端的基因组序列。带下划线的序列代表CrRNA识别位点，PAM序列为黄色，垂直虚线表示切割位点。鉴于距离内源性终止密码子（BOLD大写字母的TAA）距离为14 bp，插入位点被任意定位为距剪切位点1 bp的位置，即在SCLT1的密码子之间的最接近的交界处。在下部，密码子（上图）和相应的氨基酸性残基（下图）构成了插入物：蓝色大写字母是指可易加的链接器，然后是v5-tag（红色）和附加的外源终止密码子（黑色）。50 bp lha或rha = 50碱基对左同源臂或右同源臂。（b）使用PCR产物作为供体DNA生成具有荧光蛋白（FP）的蛋白质（您最喜欢的蛋白质，YFP）的C端标记的示意图。PCR模板由带有FP，2A元件和电阻盒（R）的标准质粒（左侧）组成。使用一对60mer引物进行PCR反应。在右侧代表了目标基因座（您最喜欢的基因，YFG）的编辑。
经济政策不确定性在可再生能源增长Nexus中的作用：Rossi-Wang因果关系测试的证据
睾丸癌的原发性肺核蛋白是一种罕见且高度攻击性的恶性肿瘤。它占原发性胸部肿瘤的约0.22％，鲜为人知，因此通常被误诊为肺鳞状细胞癌。尚未形成有效的治疗方法，预后非常差。本综述旨在总结睾丸癌原代肺核蛋白的病因，发病机理，诊断，治疗和预后，以便更好地识别它并讨论克服它的当前和创新策略。随着癌症免疫疗法和肿瘤微环境的重要性，该综述还讨论了免疫疗法和靶向肿瘤微环境是否可以改善睾丸癌原发性肺核蛋白的预后以及可能的治疗策略。 我们审查并总结了所有接受免疫疗法的原发性肺核蛋白患者的临床病理特征，这些患者接受了免疫疗法，包括初始误诊，疾病阶段，免疫组织化学标志物与肿瘤新生血管化有关 与此同时，我们总结了并分析了用PD-1（程序性细胞死亡蛋白1）/PD-L1抑制剂和可能受到免疫疗法受益的潜在群体的睾丸癌的原代肺核蛋白患者的原发性肺核蛋白蛋白患者的总生存（OS）。随着癌症免疫疗法和肿瘤微环境的重要性，该综述还讨论了免疫疗法和靶向肿瘤微环境是否可以改善睾丸癌原发性肺核蛋白的预后以及可能的治疗策略。我们审查并总结了所有接受免疫疗法的原发性肺核蛋白患者的临床病理特征，这些患者接受了免疫疗法，包括初始误诊，疾病阶段，免疫组织化学标志物与肿瘤新生血管化有关与此同时，我们总结了并分析了用PD-1（程序性细胞死亡蛋白1）/PD-L1抑制剂和可能受到免疫疗法受益的潜在群体的睾丸癌的原代肺核蛋白患者的原发性肺核蛋白蛋白患者的总生存（OS）。据我们所知，这是关于探索睾丸癌原发性肺核蛋白的肿瘤微环境和免疫疗法有效性的第一个综述。据我们所知，这是关于探索睾丸癌原发性肺核蛋白的肿瘤微环境和免疫疗法有效性的第一个综述。
基于脂质纳米粒子的核糖核蛋白递送用于体内基因组编辑
成簇的规则间隔短回文重复序列 (CRISPR) 相关 (Cas) 系统是一种通过 DNA 修复机制进行位点特异性基因破坏、修复和基因组 DNA 修饰的技术，有望成为治疗传染病和遗传疾病的基本治疗策略。对于临床应用，基于非病毒载体的 CRISPR/Cas 核糖核蛋白 (RNP) 递送非常重要，但递送效率低和缺乏实用的制造方法仍然是一个问题。我们在此报告了一种基于脂质纳米颗粒 (LNP) 的 Cas RNP 递送系统的开发，该系统基于优化设计的单链寡核苷酸 (ssODN)，可实现高效的体内基因组编辑。序列特异性 RNP-ssODN 复合物的形成被发现对于 RNP 的功能性递送很重要。此外，sgRNA 和 ssODN 之间的熔化温度 (Tm) 对体内基因敲除效率有显著影响。具有高 Tm 的 ssODN 导致有限的敲除 (KO) 活性，而接近室温的 ssODN 显示出最高的 KO 活性，这表明 RNPs 的细胞质释放非常重要。连续两次静脉注射 Tm 优化的配方分别在 DNA 和蛋白质水平上实现了约 70% 和 80% 的转甲状腺素蛋白 KO，且没有任何明显的毒性。这些发现对安全的体内 CRISPR/Cas RNP 递送技术的开发及其在基因组编辑疗法中的实际应用具有重要贡献。
大脑通讯 AIN 通讯
自从研究人员将 α-突触核蛋白确定为路易体和路易神经突的主要成分以来，研究表明它在路易体痴呆和其他“突触核蛋白病”的发病机制中起着致病作用。虽然 α-突触核蛋白代谢失调可能导致与突触核蛋白病相关的神经退化，但目前很少有对患病人类脑组织中的 α-突触核蛋白进行直接生化分析。在这项研究中，我们分析了来自大量神经病理学诊断为路易体痴呆的患者和相应对照的连续蛋白质提取物，检测到细胞溶质和膜结合生理 α-突触核蛋白转变为高度聚集的形式。然后，我们使用非变性方法对大脑皮层的水提取物（细胞溶质）进行分馏，以寻找可能与毒性相关的可溶性、与疾病相关的高分子量物种。我们将这些馏分和相应的含有路易体型聚集体的不溶性馏分应用于几个报告试验，以确定它们的生物活性和细胞毒性。最终，高分子量胞浆馏分增强了磷脂膜通透性，而不溶性路易体相关馏分则诱导了人类干细胞衍生神经元神经突的形态变化。虽然与健康的年龄匹配对照组相比，路易体痴呆患者大脑中可溶性高分子量α-突触核蛋白的浓度仅略有升高，但这些观察结果表明，大脑中一小部分可溶性α-突触核蛋白聚集体可能导致早期致病作用，而路易体相关α-突触核蛋白可能导致神经毒性。
SNCA-AS1 与衰老和帕金森病
多年来，表观遗传学，尤其是 RNA 分子研究吸引了从事癌症等复杂疾病研究的研究人员的关注。最近，这一领域也引起了那些研究神经退行性疾病和病症的人的兴趣。我们已经确定了一种调节突触核蛋白的长链非编码 RNA，通过对它的研究，我们能够对它参与的细胞过程，特别是细胞衰老和突触核蛋白参与的病因遗传机制（突触核蛋白病）有了新的认识。α-突触核蛋白 (-syn) 是由 SNCA 基因编码的 14 kDa 小蛋白。它的病理意义是显而易见的，因为它是路易氏体的主要成分，路易氏体是帕金森病 (PD) 和那些被定义为突触核蛋白病的神经系统疾病的关键标志 [1]。人们对其生理作用知之甚少，尽管研究表明该蛋白在突触和突触传递中的作用
通过 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白和基于 URA3 的标记回收对炭疽菌进行有效的多基因敲除
图 1. CRISPR-Cas9 RNP 促进 C. higginsianum 中与供体 DNA 的同源重组。（a）CRISPR-Cas9 RNP 介导的 HDR 示意图。首先，将重组 Cas9 蛋白（橙色）和针对目的基因 (GOI) 的合成 gRNA（洋红色）在体外混合以形成 RNP。其次，用 RNP 和供体 DNA 转化 C. higginsianum 原生质体，其中供体 DNA 具有选择标记 NPTII，两侧是两个同源臂。最后，通过结合选择培养基和基于 PCR 的筛选来分离用选择盒替换 GOI 的菌株。（b）URA3 敲除的构建设计。供体 DNA 具有选择标记，即 NPTII 表达盒，两侧是 0.5 kb 的同源臂，以浅灰色框表示。箭头表示扩增 ura3 基因组中特异性存在的“片段 1”和“片段 2”的引物。（c）转化子数量和 URA3 敲除率。左图显示每板转化子数量，右图显示每板 URA3 敲除率（n =5）。“-gRNA”和“+gRNA”分别代表不含和含 gRNA 的结果。星号表示统计差异（p < 0.001，Welch t 检验）。通过 PCR 筛选评估 URA3 的敲除，如 (d) 所示。（d）ura3 突变体的 PCR 筛选。使用 (b) 中所示的引物组，在含有 500 µg/ml G418 的 MA 上使用每个菌落进行 PCR。显示了从 -gRNA 和 +gRNA 转化子中随机选择的七个菌落的结果。 C. higginsianum 肌动蛋白基因 (CH63R_04240) 的 238 bp 片段被指定为肌动蛋白。凝胶左侧的数字表示 DNA 大小标记 (bp) 的位置。
利用核糖核蛋白复合物对多种鲑鱼细胞系进行有效的基因组编辑
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者（此版本于 2020 年 4 月 3 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.04.03.022038 doi：bioRxiv preprint
单氟化促进了α-突触核蛋白的分泌错误折叠相关的分泌。
包括在研究人群中；指数日期的平均年龄为58.8岁，男性为60.0％。从第一个观察的MM诊断到指数日期的时间平均为47.5个月。在索引日期的平均随访时间为20.9个月期间，有64.7％的患者（n = 55）启动了第二批批次，35.2％（n = 30）至少收到3个批次。在随访期间，平均每位患者全因医疗保健费用为722,992美元（相当于每位患者每月34,578美元[PPPM]）。总数约为90.7％（每位患者655,524美元），因为医疗保健费用与MM相关，其中66.0％是MM药物/输注成本。结论：在这项现实世界中的研究中，TCE患有高医疗保健成本的MM患者，大多数是MM相关的，主要归因于MM药物和输注成本。