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帕金森病患者中发现一种新型 α-突触核蛋白 K58N 错义变体 1
此预印本的版权所有者于 2025 年 2 月 14 日发布此版本。；https://doi.org/10.1101/2025.02.07.25321793 doi: medRxiv preprint
性别特异性的双相α-突触核蛋白反应和中间神经元的变化19仓鼠模型
女性。12，13缺乏这种严重且令人衰弱的状况的理性治疗策略代表了紧迫的医疗需求。在大多数情况下，在潜在机制中，通过高弹性反应和临界神经蛋白的DYS调节的损伤似乎是最可能的情况。14 - 18小胶质细胞（大脑的免疫细胞）作为驻留巨噬细胞对感染和损伤的反应。19然而，这种所谓的神经浮动肿瘤可能会延长或过度，甚至会导致神经元损害。20 - 22我们先前报道了小胶质细胞反应性和神经元α-突触核蛋白（ASYN）的皮质积累的迹象，叙利亚金汉斯特人的脑反应性（ASYN）感染后14天（DPI），即，在19次缓解后14天（即DPI）。23，24这种动物模型是共同19的研究，由于其对原始病毒菌株的敏感性很高，并且对人类感染的敏感性很高，尤其是在发病机理，临床方面和性别差异方面。25 - 27 Asyn是一种高度丰富，可溶性和内在无序的突触前蛋白，在突触小囊泡胞吐作用中起作用。28最近，发现了ASYN的免疫调节作用。18然而，如果Asyn蛋白水平增加，例如响应损伤，则该蛋白可以汇总成具有潜在神经毒性能力的寡聚物和不溶性纤维。29，30
利用 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白高效生成同源原代人类髓系细胞
摘要 使用 CRISPR-Cas9 对原代人类细胞进行基因组工程改造彻底改变了细胞生物学的实验和治疗方法，但人类髓系细胞在遗传上仍然难以治疗。我们提出了一种通过核转染将 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 复合物直接递送到从外周血纯化的 CD14+ 人类单核细胞中的方法，从而实现高精确基因敲除率。这些细胞可以有效分化为单核细胞衍生的巨噬细胞或树突状细胞。该过程产生的基因编辑细胞保留了髓系分化和吞噬功能的关键标记。限制因子 SAMHD1 的基因消融使 HIV-1 感染增加了 50 多倍，证明了该系统在基因型-表型查询方面的强大功能。这种快速、灵活且可扩展的平台可用于人类髓系细胞在免疫信号、炎症、癌症免疫学、宿主-病原体相互作用等方面的遗传研究，并可促进新型髓系细胞疗法的开发。简介髓系细胞是健康和疾病免疫系统中的关键参与者（Germic 等人，2019 年；Lapenna 等人，2018 年；Worbs 等人，2017 年）。单核细胞和巨噬细胞在先天免疫系统的直接分支中发挥作用，对病原体或组织损伤作出反应，并帮助调节和解决组织炎症。作为专业的抗原呈递细胞，树突状细胞可协调适应性免疫反应。鉴于髓系细胞的核心作用，髓系细胞被确定为从发育和稳态调节到病原体反应、自身炎症性疾病、纤维化和恶性肿瘤等各个方面的关键参与者也就不足为奇了 (Chao 等人，2020 年；Engblom 等人，2016 年；Manthiram 等人，2017 年；Medzhitov 和 Janeway，2000 年、1997 年；Wynn 等人，2013 年)。更好地了解这些细胞的正常行为和致病行为对于进一步加深我们对各种疾病的机制理解至关重要，为发现和发展新疗法带来了希望。我们识别新治疗靶点和构建新细胞干预措施的能力与我们对相关原代细胞类型的基因操作能力同步发展。例如，小鼠基因方法揭示了小鼠巨噬细胞的显著多样性，而骨髓亚群的基因消融为临床中类似细胞的治疗靶向铺平了道路（Wynn 等人，2013 年）。CRISPR-Cas9 介导的基因靶向显著扩展了曾经难以治疗的细胞类型的潜力，促进了重要的发现工作和增强的原代 T 细胞细胞治疗方法（Roth 等人，2018 年；Schumann 等人，2015 年；Simeonov 和 Marson，2019 年；Stadtmauer 等人，2020 年），以及使用编辑的造血干细胞/祖细胞治疗衰弱性遗传疾病（Foss 等人，2019 年；Wu 等人，2019 年）。到目前为止，CRISPR-Cas9 在原代人类髓系细胞中效率低下，限制了人类免疫系统这些关键细胞的功能遗传学研究和基因组工程。已鉴定出 SAMHD1 是髓系细胞中阻止有效慢病毒转导的关键限制因子（Hrecka 等人，2011 年；Laguette 等人，
使用 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白复合物编辑康乃馨中的乙烯生物合成基因。
摘要 本研究利用CRISPR/Cas9核糖核蛋白（RNP）复合体系统对康乃馨乙烯（ET）生物合成基因[1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）合成酶1（ACS1）和ACC氧化酶1（ACO1）]进行编辑。首先，验证靶基因（ACS1和ACO1）的保守区域，以生成不同的单向导RNA（sgRNA），然后使用体外切割试验验证sgRNA特异性切割靶基因的能力。体外切割试验表明，sgRNA在切割各自的靶区域方面具有很高的效率。将sgRNA：Cas9复合物直接递送到康乃馨原生质体中，并对原生质体中的靶基因进行深度测序。结果表明，sgRNA 适用于编辑 ET 生物合成基因，因为 ACO1 的突变频率范围为 8.8% 至 10.8%，ACS1 的突变频率范围为 0.2–58.5%。在对用 sgRNA：Cas9 转化的原生质体产生的愈伤组织中的目标基因进行测序时，在 ACO1 中发现了不同的 indel 模式（+ 1、- 1 和 - 8 bp），在 ACS1 中发现了不同的 indel 模式（- 1、+ 1 和 + 11）。这项研究强调了 CRISPR/Cas9 RNP 复合物系统在促进康乃馨 ET 生物合成的精确基因编辑方面的潜在应用。关键词 愈伤组织，CRISPR/Cas9，乙烯生物合成基因，Indel 模式，体外裂解，原生质体
申请表
Syn-OneTest®是一种基于皮肤活检的测试，旨在识别位于皮肤组织中的特定病理标记，以帮助诊断神经系统疾病。合成元素的主要诊断特征是免疫荧光技术在皮肤神经中共同识别和可视化磷酸化的磷酸化的α-核蛋白，以帮助诊断核核疾病诊断，包括帕尔氏症（包括帕克森病）（pd）（pd），dllby dl bod bot themia themia dly dl bot themia dly themia bot themia themia themia bot。 （MSA），纯自主教失败（PAF）和REM睡眠行为障碍（RBD）*。鉴定磷酸化α-突触核蛋白的异常结果表明了突触核蛋白的病理学，但无法区分突触核酸的核酸酶。临床医生应使用Syn-One测试的突触核蛋白测定法以及其他临床特征的结果，以帮助做出更具体的诊断。
关键路径研究所帕金森症关键路径联盟支持信 DDT-MBQ-000157
DDT-BMQ-000157 2024 年 8 月 19 日 关键路径研究所 帕金森关键路径 收件人： Diane Stephenson，博士 执行董事 1840 E. River Rd. 图森，AZ 85718 亲爱的 Stephenson 博士： FDA 向帕金森关键路径联盟发出这封支持信，以鼓励进一步研究和使用人类脑脊液 (CSF) 样本中的 α-突触核蛋白 (α-syn) 种子扩增试验 (SAA)，以提高针对由共同潜在生物学 α-syn 定义的神经退行性疾病的早期干预的临床试验的效率。过去十年的研究表明，大脑中神经元错误折叠蛋白的积累是许多神经退行性疾病的主要病理特征，包括帕金森病 (PD) 和路易体痴呆 (DLB)。在某些疾病中，这些蛋白质可以在临床症状出现前数年在体内检测到，并有可能在疾病的早期阶段提供更一致的潜在生物学识别。建议使用 α-突触核蛋白种子扩增试验作为易感性/风险生物标志物，以丰富 PD 和相关临床综合征的临床试验，这些临床试验的参与者在生物学上被定义为对病理标志蛋白突触核蛋白呈阳性。这组神经退行性疾病通常通过临床症状学诊断，但它们具有基于病理性 α-突触核蛋白存在的共同潜在生物学，可通过 α-突触核蛋白 SAA 在体内进行评估。最近，一个由国际专家和患者组织组成的团队开发了一种新的生物学定义和分期框架，用于以 α-突触核蛋白病理为特征的疾病。该框架，即神经元 α-突触核蛋白疾病综合分期系统 (NSD-ISS)，提出了如何在治疗开发中使用生物标志物
CRISPR-Cas9 核糖核蛋白介导的成熟原代先天免疫细胞中的基因组编辑
CRISPR 基因组工程已成为一种功能性研究免疫系统调节复杂机制的强大工具。尽管数十年来一直致力于对先天免疫进行遗传重编程，但当前方法的实用性受到体内成熟细胞谱系的敲除效率低或特异性有限的限制。在这里，我们描述了一种优化的非病毒 CRISPR-Cas9 核糖核蛋白 (cRNP) 基因组编辑策略，该策略可对成熟的原代小鼠先天淋巴细胞 (ILC) 和髓系细胞进行基因组编辑，从而导致单次电穿孔导致单或双靶基因表达几乎完全丧失。此外，我们描述了体内过继转移小鼠模型，该模型可用于使用 cRNP 编辑的幼稚自然杀伤 (NK) 细胞和骨髓衍生的常规树突状细胞前体 (cDCP) 筛选病毒感染期间的基因功能。该资源将增强靶基因发现，并为小鼠先天免疫系统中的基因编辑提供一种特定且简化的方法。
神经炎症与突触核管中神经血管单元之间的联系
神经血管单元（NVU）由血管细胞，神经胶质细胞和神经元组成。作为中枢神经系统中的基本功能模块，NVU在微环境和血脑屏障的整体中保持体内平衡。NVU的破坏及其成分之间的相互作用参与突触核苷的病理生理学，其特征在于α-突触核蛋白的病理积累。神经炎症有助于突触核断病的病理生理，包括帕金森氏病，多种系统萎缩和伴有路易体的痴呆症。本综述旨在总结NVU中神经胶质细胞和血管细胞的神经纤维反应。我们还回顾了神经胶质细胞和血管细胞之间的串扰，神经胶质细胞和周细胞之间以及小胶质细胞和星形胶质细胞之间的神经炎症。最后，我们讨论了α-突触核蛋白如何影响神经炎症以及神经炎症如何影响α-突触核蛋白的聚集和扩散，并分析突触核蛋白酶病中α-类核蛋白的不同特性。
小鼠 γ-突触核蛋白启动子介导的哺乳动物视网膜神经节细胞中的基因表达和编辑
4 王启照 1,3 , 庄培 1,3 , 黄浩亮 1 , 李亮 1 , 刘亮 1 , Hannah C. Webber 1 , 5 Roopa Dalal 1 , Leonard Siew 1 , Clarisse M. Fligor 2 , Kun-Che Chang 1 , Michael Nahmou 1 , Alexander 6 Kreymerman 1 , Yang Sun 1 , Jason S. Meyer 2 , Jeffrey Louis Goldberg 1 和杨虎 1,* 7 8
通过脂质纳米颗粒递送稳定的 CRISPR–Cas9 核糖核蛋白对肺和肝脏进行编辑
如果能够可靠地生产有效的 RNP-LNP 复合物，则脂质纳米颗粒 (LNP) 递送成簇的规律间隔的短回文重复 (CRISPR) 核糖核蛋白 (RNP) 可以实现高效、低毒和可扩展的体内基因组编辑。在这里，我们从嗜热地芽孢杆菌 (GeoCas9) 中设计了一种耐热的 Cas9，以生成 iGeoCas9 变体，与天然 GeoCas9 酶相比，该变体能够对细胞和器官进行 100 倍以上的基因组编辑。此外，iGeoCas9 RNP-LNP 复合物可编辑多种细胞类型，并在接受共同递送的单链 DNA 模板的细胞中诱导同源性定向修复。使用组织选择性 LNP 制剂，我们观察到在接受单次静脉注射 iGeoCas9 RNP-LNP 的报告小鼠的肝脏和肺中基因组编辑水平为 16 œ 37%。此外，与可生物降解的 LNP 复合的 iGeoCas9 RNP 可以编辑肺组织中致病的 SFTPC 基因，平均效率为 19%，这比之前使用病毒或非病毒递送策略观察到的基因组编辑水平有了很大的提高。这些结果表明，热稳定性 Cas9 RNP-LNP 复合物可以扩大基因组编辑的治疗潜力。