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由TGFβ衍生的免疫调节疫苗诱导的TGFβ特异性T细胞直接和间接调节与肿瘤相关巨噬细胞和成纤维细胞的表型
摘要胰腺癌的肿瘤微环境（TME）是高度免疫抑制的。我们最近开发了一种转化的生长因子（TGF）β的免疫调节疫苗，该疫苗通过靶向TME中的免疫抑制和脱发，在胰腺癌的鼠模型中控制肿瘤的生长。我们发现，用TGFβ疫苗的治疗不仅降低了肿瘤中M2样肿瘤相关的巨噬细胞（TAM）和与癌症相关的成纤维细胞（CAF）的百分比，而且还降低了偏振CAF的偏光CAF，而且远离肌纤维纤维细胞样的表型。然而，TGFβ疫苗在TAM和CAF表型上的免疫调节特性是否是TGFβ特异性T细胞对这些亚群的识别和随后靶向的直接结果，还是TME内诱导的整体调节的间接结果。通过ELISPOT和流式细胞仪评估TGFβ特异性T细胞对M2巨噬细胞和成纤维细胞的识别。通过用肿瘤条件的培养基培养M2巨噬细胞或成纤维细胞，评估了TGFβ疫苗对这些细胞子集的间接和直接影响，或分别用从用TGFβ疫苗或对照疫苗的小鼠脾脏中分离出的T细胞。通过流式细胞仪和生物质量多重系统（Luminex）评估表型的变化。我们发现由TGFβ疫苗诱导的TGFβ特异性T细胞可以识别M2巨噬细胞和成纤维细胞。TAMS倾向于具有促进肿瘤功能，具有免疫抑制表型，并且与胰腺癌具有M2样表型时的总体生存率降低有关。此外，我们证明了M2巨噬细胞和CAF的表型可以由TGFβ特异性T细胞直接调节TGFβ疫苗诱导的TGFβ特异性T细胞，以及由于TME内疫苗的免疫 - 调节作用而间接调节。此外，肌成纤维细胞类似CAF会产生僵硬的细胞外基质，从而限制T细胞浸润，阻碍免疫疗法在去肿瘤肿瘤中的有效性，例如胰腺导管腺癌。通过用TGFβ的TAM和CAF靶向基于TGFβ的免疫调节疫苗，可以减少胰腺肿瘤中的免疫抑制和免疫排除。
水凝胶力学调节成纤维细胞DNA甲基化和染色质凝聚
摘要：细胞机械力转导在纤维化疾病进展过程中的成纤维细胞活化中起着核心作用，导致组织僵硬性增加和器官功能下降。虽然表观遗传学在疾病机械力转导中的作用已开始受到重视，但对于基质力学（尤其是机械输入的时机）如何调控成纤维细胞活化过程中的表观遗传学变化（例如DNA甲基化和染色质重组）仍知之甚少。在本研究中，我们设计了一个透明质酸水凝胶平台，其刚度和粘弹性可独立调节，以模拟正常（储能模量，G' ~ 0.5 kPa，损耗模量，G'' ~ 0.05 kPa）至纤维化程度逐渐加重（G' ~ 2.5 和 8 kPa，G'' ~ 0.05 kPa）的肺力学。随着基质硬度的增加，人肺成纤维细胞在1天内表现出心肌相关转录因子A (MRTF-A) 的扩散和核定位增加，并且这种趋势在较长的培养时间内保持稳定。然而，成纤维细胞的整体DNA甲基化和染色质组织表现出时间依赖性的变化。成纤维细胞最初在较硬的水凝胶上表现出DNA甲基化和染色质去浓缩增加，但随着培养时间的延长，这两项指标均有所下降。为了研究培养时间如何影响成纤维细胞核重塑对机械信号的响应性，我们设计了可进行原位二次交联的水凝胶，使其能够从模拟正常组织的柔顺基质过渡到类似于纤维化组织的较硬基质。当培养仅1天后开始硬化时，成纤维细胞迅速做出反应，并表现出DNA甲基化和染色质去浓缩增加，类似于静态较硬水凝胶上的成纤维细胞。相反，当成纤维细胞在第7天经历后期硬化时，DNA甲基化和染色质凝聚没有变化，表明诱导了持续的成纤维细胞表型。这些结果突显了成纤维细胞在动态机械扰动下活化时相关的时间依赖性核变化，并可能提供控制成纤维细胞活化的靶向机制。目录条目
纤溶酶原激活剂抑制剂1通过促进程序性细胞死亡 - 凸的表达1
纤维化系统与癌症进展之间的相关性已被广泛认可（1-3）。该机制的中心因素包括尿激酶纤溶酶原激活剂（UPA），UPA受体（UPAR）和UPA抑制剂，纤溶酶原激活剂抑制剂1（PAI-1）。鉴于与肿瘤UPA表达增加的证据与降低的总生存率和随之而来的PAI-1对UPA的抑制作用相关的证据，假设PAI-1对pai-1具有抗肿瘤特性，这些特性延迟了癌症的进展（4，5）。矛盾的是，已经发现高水平的PAI-1与各种癌症的预后不良相关。这被称为“ PAI-1悖论”（6-8）。在各种肿瘤中PAI-1的过表达是临床结果不佳和对治疗反应不佳的有力预测指标（9，10）。的确，PAI-1是一种多功能蛋白，可调节纤维化以及细胞增殖，迁移和凋亡（11-13）。此外，在肿瘤微环境中由各种细胞类型产生后，包括肿瘤细胞，脂肪细胞，巨噬细胞，菌丝，培根细胞，平滑肌细胞和内皮细胞（10），PAI-1，PAI-1在肿瘤发生中扮演自身分泌和旁骨作用（14）。虽然足够的数据表明PAI-1与癌症之间存在联系，但其对癌症进展的精确影响仍在争论中。程序性细胞死亡配体1（PD-L1）与其受体，程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）结合，并抑制T淋巴细胞增殖，细胞因子产生和细胞溶解活性，抑制免疫反应（15，16）。尽管这种机制有助于抵消自身免疫性疾病发病机理，但它也阻碍了免疫细胞消除肿瘤细胞的能力（17、18）。与主要在免疫细胞上表达的PD-1不同，PD-L1在肿瘤细胞和周围细胞上表达，包括肿瘤相关的巨噬细胞（TAM）和癌症 - 相关的纤维细胞（CAFS）（CAFS）（19，20）。因此，PD-L1在逃避肿瘤免疫反应中起着重要作用，几种转录因子调节其转录激活（21）。JAK/STAT途径涉及与PD-L1启动子结合并调节PD-L1表达的关键转录因子（18，22）。尽管大量数据支持PAI-1参与癌症进展，但PAI-1是否有助于肿瘤免疫
评估免疫纤维化轴
免疫纤维化轴在急性心肌梗塞后心脏重塑中起关键作用。成像方法以监测小鼠中的温度炎症和细胞细胞激活的方法已广泛使用。然而，定量测量的可重复性仍然具有挑战性，尤其是在多个想象中心。我们旨在确定小鼠心肌梗死后在2个设施中获得的定量炎症和纤维细胞激活图像的可重复性。方法：用68 GA-DOTA-ECL1I进行了冠状动脉连接和顺序成像，以评估在心肌梗死后7 D时在7 d时心肌梗死后3 d时3 d的趋化因子受体2型表达。图像是使用第二个中心开发的本地或共识协议在1个中心获取的；这些方案在ISO肾上腺麻醉和注入的示踪剂剂量的持续时间内有所不同。使用共识方案在第二个部位扫描第二组动物。每个站点进行的图像分析也仅由1个站点进行。结果：在使用共识方案时，在梗死领域中的68 Ga-dota-Ecl1i的吸收往往更高（P 5 0.03）。在68 GA-FAPI-46的协议采集之间没有观察到差异。与局部方案相比，共识促销降低了单个动物之间的变异性。当将其标准化为体重为SUV时，这种差异会受到明显的影响。当使用匹配的共识方案时，在现场B上获得的图像中，每克每克组织注射剂量的68 GA-DOTA-ECL1I梗塞区域梗死百分比要高于在a站点A上获得的剂量（P 5 0.006）。每克组织和SUV的注入剂量的百分比在68 GA-FAPI-46之间都是可比的。位点的图像分析差异很大，但是当在现场A分析所有图像时，这种差异得到了减轻。结论：标准化的采集方案的应用可能会降低数据集中的可变性，并促进临床前成像中心之间分子放射性分布的比较。像临床研究一样，多个中心临床前研究应使用基于核心的图像分析来最大程度地提高跨站点的可重复性。
利用肿瘤微环境进行妇科癌症治疗
对妇科癌和宿主免疫力之间的复杂串扰进行了广泛的研究，揭示了对肿瘤发育的迷人见解。包括各种非肿瘤细胞和可溶性介体的肿瘤微环境（TME）在支持妇科癌症发展中起着关键作用（1，2）。在这些元素中，肿瘤 - 纤维化淋巴细胞（TILS）成为捍卫者，配备了识别和消除癌细胞。此外，TME包括与癌症相关的纤维细胞（CAF），内皮细胞，趋化因子，细胞因子，生长因子和抗体，共同调节癌症的启动，进步，甚至治疗反应（3-5）。癌细胞和其他TME成分释放了许多可以抑制或激活免疫细胞功能的免疫调节信号，从而有效地塑造了免疫反应（6-11）。因此，根据其组成，TME有可能将免疫系统从抗肿瘤模式转换为肿瘤状态（图1）。令人鼓舞的是，针对TME成分的治疗方法，包括髓样衍生的抑制细胞（MDSC），与肿瘤相关的巨噬细胞（TAM）和调节性T细胞（Tregs）（Tregs），并在临床前和临床研究中都表现出了令人鼓舞的抗肿瘤活性（12-18）。因此，探索TME的预测和治疗价值是推进妇科癌症治疗的明显希望。在这里，我们发表了一篇研究主题，介绍了六篇文章，重点介绍了针对妇科癌症的TME靶向治疗策略。Yu等人的评论。强调了血管生成在癌症免疫疗法的效率中的关键作用，特别是在卵巢癌的背景下。概述了血管生成，新血管的形成，不仅支持肿瘤的生长和转移，而且显着影响TME，从而影响了免疫疗法（例如免疫检查点抑制剂（ICIS））的成功。通过通过异常肿瘤脉管系统促进血液灌注不足，缺氧和免疫逃避，血管生成为有效的免疫疗法带来了艰巨的障碍。抗血管生成疗法被贝伐单抗等药物示例，其针对这些血管异常，不仅破坏了肿瘤血液供应，而且可以潜在地重塑TME，从而增强了抗肿瘤免疫力。临床和临床前研究表明
X射线诱导的旁观者效应在于以钙依赖性的方式形成DNA破裂：实验过程的影响和个体因子
背景。作为先天免疫系统效应，天然杀伤细胞（NK细胞）在肿瘤免疫疗法反应和临床结果中起着重要作用。方法。在调查中，我们收集了TCGA和GEO队列的卵巢癌样品，总共包括1793个样品。此外，还包括四个高级浆液卵巢癌SCRNA-SEQ数据以筛选NK细胞标记基因。加权基因共表达网络分析（WGCNA）识别与NK细胞相关的核心模块和中心基因。进行了“计时器”，“ Cibersort”，“ McPcounter”，“ Xcell”和“ Epic”算法，以预测每个样品中不同免疫细胞类型的效率特征。使用套索量算法来建立风险模型来预测预后。最后，进行了药物敏感性筛查。结果。我们首先在每个样品的填充中对NK细胞进行了评分，并发现NK细胞水平的水平影响了卵巢癌患者的临床结果。因此，我们分析了四个高级浆液卵巢癌SCRNA-SEQ数据，在单细胞水平上筛选NK细胞标记基因。WGCNA算法筛选基于大量RNA转录组模式的NK细胞标记基因。最后，我们的研究中总共包括42个NK细胞标记基因。随后，使用14个NK细胞标记基因为Meta-GPL570队列开发14基因预后模型，将患者分为高风险和低风险亚组。结论。该模型的预测性能在不同的外部人群中得到了很好的验证。肿瘤免疫微环境分析表明，预后模型的高风险评分与M2巨噬细胞，癌症相关的纤维细胞，造血干细胞，基质评分以及NK细胞，NK细胞，细胞毒性评分，B细胞分数，B细胞和T细胞CD CD4+TH1正相关。此外，我们发现博来霉素，顺铂，多西他赛，阿霉素，吉西他蛋白和依托泊苷在高风险组中更有效，而紫杉醇对低风险组患者的治疗性更好。通过利用NK细胞标记基因在我们的研究中，我们开发了一种新功能，能够预测患者的临床结果和治疗策略。
基因设计的巨噬细胞持续存在于实体瘤中，并局部提供治疗蛋白以激活免疫反应
背景我们设计了未分离的外周血单核细胞（PBMC），以充当抗原呈递细胞（APC），产生有效的CD8+ T细胞反应。我们研究了基于PBMC的癌症与靶向白细胞介素2变体（IL2V）的综合疗效；抗细胞死亡蛋白1（MUPD1-IL2V）和抗纤维细胞激活蛋白（MUFAP-IL2V）。方法，我们使用微流体细胞工程系统（CellSqueeze®）生成了基于PBMC的癌症疫苗，该系统促进了直接的胞质抗原递送，并在PBMC中启用细胞子组以充当APC。所使用的免疫细胞因子包含与抗体相关的基质或免疫细胞（分别为AFAP和APD-1）拟合抗体的IL2V，并具有修饰的FCR结合。与野生型IL-2相比，IL2V部分仅消除了与IL-2RA（CD25）的结合，仅导致IL-2RGB结合，从而完全维持对NK和CD8+ T细胞的活性，同时避免TREG活性和CD25介导的毒性。Results In the murine TC-1 HPV tumor model, SQZ-PBMC- based vaccines show efficacy as monotherapy (1e6 cells admin- istered iv on day 14 post-tumor implant), while SQZ combi- nation therapy with targeted immunocytokines, muPD1-IL2v and muFAP-IL2v (2 mg/kg or 1 mg/kg, respectively, adminis-在第21、28和35天的肿瘤植入物中进行了IV，这显着延迟了肿瘤的生长，并改善了鼠TC-1 HPV肿瘤模型的生存率。在一项机械研究中，SQZ-PBMC与MUPD1-IL2V结合使用，导致肿瘤内抗原特异性CD8+ T细胞的扩张增加组合治疗组的中位生存期在肿瘤后第84天保持不确定，而单一治疗治疗组的中位生存时间分别计算出MUFAP-IL2V，MUPD1-IL2V和SQZ单一疗法组的中位生存时间为36.5、42和70天。初始肿瘤清除率后，无肿瘤的小鼠（SQZ单一疗法的2/12只动物；用MUFAP-IL2V进行SQZ的8/12只动物；与MUFAP-IL2V的动物； 11/11动物，用于使用MUPD1-IL2V的SQZ进行SQZ，第84天都重新挑选了第84天，并至少在肿瘤后至少恢复了7周后，并在静止后响应了7周，建议静止后的静力，建议静止量。
用于手指小米的新型基于GBS的SNP标记及其在遗传多样性分析中的使用
eleusine coracana（L。）Gaertn。（通常称为纤维小米）是一种用于食物和饲料的多功能作物。基因组工具对于作物基因库的表征及其基因组主导的繁殖需要。基于高通量测序的表征代表多种农业生态学的纤维细胞种质，被认为是确定其遗传多样性的有效方法，从而提出了潜在的繁殖候选者。在这项研究中，使用基因分型（GBS）方法同时鉴定新型的单核苷酸多态性（SNP）标记和基因型288纤维小米辅助量，从埃塞俄比亚和津巴布韦收集。使用5,226个BI-Callelic SNP在个人和组水平上进行表征，最小等位基因频率（MAF）高于0.05，分布在2,500个纤维小米参考基因组的2,500支支架上。SNP的多态性信息含量（PIC）平均为0.23，其中四分之一的PIC值超过0.32，这使得它们非常有用。基于地理位置的288个加入分为七个种群和种质交换的潜力显示，观察到的杂合性范围狭窄（HO; 0.09 - 0.11）和预期的杂合性（HE），其范围超过了Twofold，从0.11到0.26。等位基因在不同群体中独有的等位基因也得到了识别，这值得进一步研究其与理想性状的潜在关联。在AMOVA，群集，主要坐标和人口结构分析中，埃塞俄比亚和津巴布韦附属之间的高遗传分化很明显。分子方差的分析（AMOVA）揭示了基于地理区域，原产国，流动式，泛质类型和易耐受性的种类群之间的高度显着遗传分化（p <0.01）。菲格尔小米附属的遗传多样性水平在埃塞俄比亚内部的位置中适度变化，北部地区的加入水平最低。在邻居加入聚类分析中，这项研究中包括的大多数改进的品种都非常紧密，这可能是因为它们是使用遗传学上不同的种质和/或以类似性状（例如谷物产量）选择的。通过来自两国不同地区的跨植物上不同的遗传学加入来重组等位基因，可能会导致出色品种的发展。
GW SMHS研究展示柜
炎症是皮肤伤口愈合过程中最早的阶段之一，是组织修复的关键步骤。在此阶段，复杂的细胞 - 细胞通信网络会在伤口中产生促炎环境，并募集免疫细胞（例如巨噬细胞），以帮助愈合过程。虽然组织居住的免疫细胞和角质形成细胞长期以来因其在皮肤伤口愈合的早期免疫反应中的作用而受到赞赏，但对于间充质细胞如何有助于损伤引起的炎症的早期步骤，知之甚少。使用单个核RNA测序，我们定义了小鼠皮肤中1天后（DPW）炎症相关的基因表达的变化。我们检测到多个成纤维细胞亚群，具有促炎基因的表达增加，包括许多免疫细胞化学吸引剂。为了验证免疫细胞募集是损伤后成纤维细胞的功能作用，我们从未受伤的皮肤和伤口后1.5天（DPW）分离了成纤维细胞（DPW），并测试了它们在体外诱导巨噬细胞迁移的能力。伤口成纤维细胞诱导的迁移明显高于未受伤的皮肤的成纤维细胞，并且巨噬细胞迁移的量与角质形成细胞和巨噬细胞诱导的迁移量相当。这些发现暗示成纤维细胞是髓样细胞的有效介质涌入伤口。有趣的是，进一步的计算分析表明，具有更大促炎潜力的成纤维细胞与皮肤的更深层有关。这一发现支持其他研究，强调了不同成纤维细胞子集的不同作用，具体取决于它们居住在皮肤中的位置。尤其是，与SCA1-成纤维细胞相比，在炎症早期，SCA1+成纤维细胞富含许多免疫细胞恢复趋化因子，包括CCL2和CCL7。我们扩展了对成纤维细胞衍生因素对免疫细胞募集的影响的分析，对体内伤口模型，在体内伤口模型中，在成纤维细胞中有条件地击倒了CCL2基因。敲除小鼠在修复的炎症阶段的伤口中存在巨噬细胞和单核细胞的50％以上（p <0.05）。这些动物在5DPW时还表现出显着较低的血运重建和再上皮化，表明愈合过程中的鲜明缺陷，损失成纤维细胞衍生的CCL2（p <0.05）。一起，这些结果突出了皮肤成纤维细胞对炎症环境的最重要贡献，在最早的修复阶段以及免疫细胞失调对随后的组织愈合的影响。
项目标题：生物学样本中新的第二次谐波生成方式，以分离胶原蛋白和肌球蛋白
肌球蛋白移动真核生物的肌肉，是一种微小的分子运动[1]。它通过消耗三磷酸腺苷（ATP）来产生力并进行机械工作。作为线性电动机，它可以通过活细胞内的细胞骨架的轨道样肌动蛋白丝或微管进行运动。以这种方式，亚细胞结构，以及较大的单位（例如细胞或生物）可以以定向方式移动[1，2]。使用基因工程方法，已经有可能产生向后移动的肌球蛋白纳米运动[3]。X射线结构分析和动力学研究等方法进一步阐明了具有技术兴趣的运动蛋白的有序纳米结构的自我组织。对于分子医学，了解分子线性运动和组织中稳定结构之间的结构关系也很重要。骨骼肌由伸长的纤维细胞和肌纤维沿整个长度平行排列[1]组成。肌原纤维包含纵向肉瘤，其肌动蛋白肌膜的高阶和肌球蛋白蛋白具有收缩。骨骼肌的众所周知的横向条纹是由于肌纤维在肌肉纤维中的平行排列而产生的（图1）。几种肌肉纤维沿相同方向捆绑在一起。这些由细胞外基质的结构蛋白（尤其是胶原蛋白纤维）组织。从胶原蛋白家族的大而异构的群体中，发现大部分是纤维状胶原蛋白。但是这种变化可能具有很大的潜力。由于非中心对称结构，胶原蛋白和肌球蛋白的特异性显微成像是可能的[4,5,6,7,8]。使用聚焦激光辐射的超短脉冲会导致瞬态高功率密度和二阶频率加倍（第二次谐波产生，SHG）[7，8]。通过在近红外范围内使用激发波长，第二个谐波渗透到组织中，肌肉组织可以在三个维度中无损地映射（图2）。SHG极化法可用于区分肌球蛋白和胶原蛋白，并进一步胶原蛋白纤维的方向[7，8，9]。可以通过对向后信号进行评估来获得进一步的对比信息。到目前为止，几乎没有任何方法可以调节SHG生成波长以区分肌球蛋白和胶原蛋白纤维[8，9]。但是，一些矛盾的结果要求通过评估光谱信息进行多模式研究。到目前为止，在生物样品中的第二次谐波中，尚未证明完全kleinman对称性的假设和SHG效率的单调降低。相反，最近的研究表明了一种复杂的行为，更明显地使用向后信号而不是前向信号[8，9]。