细胞培养

从挪威养殖大西洋比目鱼 Hippoglossus hippoglossus 细胞培养中分离诺达病毒

摘要：本文介绍了从患有病毒性脑病和视网膜病变 (VER) 的大西洋比目鱼 Hippoglossus hippoglossus 细胞培养物中分离诺达病毒的方法。细胞系 SSN-1 接种了患病幼鱼的组织材料（首次喂食后 60 天）。接种后约 5 天出现广泛的细胞病变效应 (CPE)，在同一细胞系中传代数次后也观察到了这种现象。在间接免疫荧光试验中，感染培养物的细胞与抗鲈鱼 Dicentrarchus labrax 诺达病毒的抗血清表现出反应性。使用针对条纹鲈 Pseudocaranx dentex 诺达病毒的特异性引物，用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 分析感染细胞，结果得到预测大小的产物。感染的 SSN-1 细胞的电子显微照片显示病毒颗粒大约小于 30 纳米。用受感染的 SSN-1 细胞的上清液对大西洋大比目鱼幼体（孵化后 4 天）进行攻击，导致 VER 的产生，这通过对攻击后第 9 天采集的幼体样本进行的免疫组织化学检测得到证实。目前的结果表明，使用 SSN-1 细胞系分离了来自大西洋大比目鱼的诺达病毒，并且在细胞培养中繁殖的病毒保留了毒力。