抽象的穿梭RNA结合蛋白协调基因表达的核和细胞质步骤。SR家族蛋白调节细胞核中的RNA剪接,其中包括SRSF1(包括SRSF1)的子集,核和细胞质之间的穿梭,影响后切割过程。然而,这一点的生理意义尚不清楚。在这里,我们使用基因组编辑来敲入SRSF1中的核保留信号(NRS),以创建具有仅保留在细胞核中的SRSF1蛋白的小鼠模型。srsf1 NRS/NRS突变体显示出小体型,脑积水和免疫力精子,这些特征与纤毛缺陷有关。我们观察到了一部分mRNA的子集的翻译减少,并降低了参与多重生成的蛋白质的丰富度,并且在该小鼠模型中得出的细胞和组织中纤毛超微结构和运动性的破坏。这些结果表明,如此处观察到的,在高细胞需求的背景下,在高细胞需求的背景下,SRSF1穿梭用于重新编程基因表达网络。
图 1 CT26 细胞中白蛋白摄取的特征。(A)将细胞与 FITC 标记的白蛋白一起孵育。通过流式细胞术测定 FITC 阳性细胞(散点图,R2)和平均 FITC 荧光强度(条形图)(ex/em:488/530 nm,荧光强度标准化为自发荧光对照)。(B)通过流式细胞术测定内吞抑制剂 M b CD、CHP 和 EIPA(1 小时预处理)对 3 小时后 FITC 标记白蛋白摄取的影响。(A)和(B)中的值是三个独立实验的平均值 SD。通过单因素方差分析和 Dunnett 多重比较检验检验统计学显着性(* p < 0.05,** p < 0.01 和 *** p < 0.001)。 (C) 通过共聚焦显微镜验证了 FITC 标记白蛋白 (绿色) 的摄取和三种内吞抑制剂的影响。细胞核 (蓝色) 和膜 (红色) 分别用 DAPI 和 WGA 共染色。图像显示所有三个通道的叠加。 (D) 未经治疗的小鼠的 sc CT26 肿瘤中白蛋白含量的免疫组织化学分析 (用 20 和 63 物镜进行的显微镜检查)。细胞核和白蛋白分别用苏木精 (紫色) 和 3,3 0 -二氨基联苯胺 (棕色) 显影。 (E) 用 16.5 mg kg 1 荧光素标记的马来酰亚胺 (绿色) 治疗 CT26 小鼠。30 分钟和 5 小时后收获肿瘤,然后对细胞核 (DAPI,蓝色) 和血管 (内粘蛋白,红色) 进行免疫荧光染色。使用 40 倍物镜通过荧光显微镜进行评估。图像显示所有三个通道的叠加。使用 Definiens 软件计算每平方毫米的荧光强度(左图中的条形图)。荧光强度值以两个不同肿瘤样本的平均值 SD 表示。
图 5. 三元复合物形成的亚细胞定位 (A) BRD4 (红色) 仅定位于细胞核,而大多数 HA-KLHL20 (绿色) 位于细胞质中。(左) BRD4 (红色) 和 HA- KLHL20 (绿色) 通道的合并图像。(右) 与 DAPI 染色的合并图像。(B) Strep-KLHL20 和 HA -KLHL20 (绿色) 显示出相似的定位模式。(C) BTR2004 不会改变 BRD4 (红色) 亚细胞定位。DAPI 核染色为蓝色。(D) BTR2004 不会改变 KLHL20 (绿色) 亚细胞定位。DAPI 核染色为蓝色。(E) 使用共聚焦显微镜成像通过邻近连接分析 (PLA) 揭示 BTR2004 介导的三元复合物形成。 (F) 定量 PLA 信号(使用 Imaris 程序)显示三元复合物主要在细胞核中形成。 (G) Exportin 1 抑制剂 KPT276 不能阻止 BRD2 降解,表明核形成的三元复合物被核蛋白酶体降解。
抗病毒细胞因子干扰素(IFN)激活IFN刺激基因(ISGS)的表达以建立抗病毒态。粘菌病毒抗性2(MX2/MXB)是一种ISG,它抑制了HIV-1的核进口并与病毒式衣壳和细胞核转运机械相互作用。我们将肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)亚基MyPT1和PPP1CB作为MX2的正常作用调节剂,与其N末端结构域(NTD)相互作用。我们证明了NTD在14、17和18的位置的丝氨酸磷酸化抑制了MX2抗病毒功能,可防止与HIV-1帽骨和核转运因子的相互作用,并由MLCP逆转。重要的是,NTD丝氨酸磷酸化还阻碍了MX2介导的细胞核货物进口的抑制作用。我们还发现,IFN治疗降低了这些丝氨酸处的磷酸化水平,并概述了稳态调节机制,其中通过磷酸化对MX2的抑制以及MLCP介导的去磷酸化的抑制作用,平衡MX2对MX2对正常细胞与HISATE免疫功能的有害作用平衡,与HIV-1抗HIV-1。
长链非编码 RNA 是包括免疫反应在内的生物过程的重要调节因子。lncRNA 的免疫调节功能主要在小鼠模型中得到揭示,而对 lncRNA 在人类免疫反应中的了解有限。在这里,我们鉴定出 lncRNA LUCAT1,它在受脂多糖和其他先天免疫刺激刺激的人类髓系细胞中上调。在髓系细胞中靶向删除 LUCAT1 会增加响应 LPS 的 I 型干扰素刺激基因的表达。相反,增加 LUCAT1 表达会导致可诱导的 ISG 反应降低。在活化细胞中,LUCAT1 在细胞核中富集,并与染色质结合。此外,LUCAT1 通过与细胞核中的 STAT1 相互作用来限制干扰素刺激基因的转录。总之,我们的研究强调了 lncRNA LUCAT1 作为诱导后反馈调节因子的作用,其功能是抑制人类细胞的免疫反应。
单细胞凝胶电泳测定法,也称为彗星测定法,是一种广泛使用的方法,可在视觉上评估DNA损伤。受到碱性条件的影响,具有不同分子量和电荷的DNA分子在电场中表现出不同的行为。未损坏的DNA分子保留在细胞核内,并在电泳过程中显示出最小的迁移,而变性的DNA片段则从核中迁移。遗传物质从细胞核到尾部的迁移增加,称为“彗星损伤”,是DNA损伤的量度。彗星测定基本上涉及量化通过光学显微镜获得的图像[5]。此外,人类8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHDG)ELISA测定是一种精确的体外定量技术,用于检测人类唾液,血清,尿液和质量样品中的8-OHDG。8-OHDG是由于鸟嘌呤的羟基自由基攻击引起的活性氧(ROS)诱导的DNA碱基修饰。通过ELISA对8- OHDG浓度的量化由于其稳定性而变得越来越流行,
什么是细胞外遗传物质?遗传物质(DNA)位于细胞核内,但当细胞死亡时,DNA会被释放到周围组织中,然后称为细胞外遗传物质。细胞外遗传物质存在于体液中,包括血液。通过分析细胞外遗传物质的数量、结构、碱基序列等,可以获得身体状况的信息。
在真核生物中,DNA 有多个包装层次,用于多种用途。这让 DNA 在细胞核中占用更少的空间,但同时也保护 DNA 免受物理损伤,并调节 DNA 对蛋白质的可及性。例如,当 DNA 包装得非常紧密时,通常“读取”它的蛋白质无法访问它,从而使一些基因失去活性。
一个主要发现是发现了一对称为“纳图综合体”的转录因子。这种复合物似乎调节基因表达并影响某些基因在细胞核中的定位,这一发现可以更好地了解基因沉默机制,这对于调节发育,免疫反应和其他重要生物学过程至关重要。
已经表明,单甲基化的帽结构在核事件中起着重要作用。盖结构与增强前mRNA剪接有关。最近,还建议这种结构促进RNA从细胞核到细胞质的转运。我们先前已经从HELA细胞核提取物中鉴定出并纯化了8OKD核盖结合蛋白(NCBP),这可能会介导这些核活性。在本报告中,我们描述了编码NCBP的互补DNA(cDNA)的克隆。确定了NCBP的部分蛋白质序列,并从HELA cDNA文库中分离出NCBP的全长cDNA。该cDNA编码了790个氨基酸的开放阅读框,其计算的分子质量为91,734 daltons,其中包含大多数确定的蛋白质序列。但是,蛋白质序列与任何已知蛋白质都没有显着同源性。转染实验表明,在HELA细胞中瞬时表达的表位标记的NCBP仅在核质中定位。使用截短的NCBP cDNA进行的类似实验表明,这种核定位活性由N末端70氨基酸区域赋予。