1. 每瓶接种 5x10 6 个 SF9 细胞,另留一个瓶作为阴性对照。2. 按照 A 部分中概述的方法,使用以下体积和量:10uL 杆状病毒 DNA(0.1ug/uL)2ug 质粒 DNA 1mL 转染缓冲液 B 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 1mL 转染缓冲液 A 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 7mL TMN/FH
• 将水浴预热至 37 ± 2°C 以进行游离 DNA 降解步骤 • 将水浴预热至 95 ± 5 °C 以进行 DNA 提取步骤 • 准备与样品数量对应的 Cryotube TM 小瓶,在每个 Cryotube TM(游离 DNA 降解缓冲液)中移取 0.5 ml 激活缓冲液和 2 µl 游离 DNA 降解试剂 • 将所需数量的 DNApure 柱插入 1.5 ml 管(提供) • 所有离心步骤必须在室温下进行 1. 使用无菌镊子将过滤器折叠两到三次,以获得圆锥体,如图 1 所示 2. 将膜转移到含有游离 DNA 降解缓冲液的 Cryotube TM 小瓶中 注意:将膜过滤器插入小瓶时必须使圆锥体的尖端朝向 Cryotube TM 小瓶的顶部(图 1)
在37°C,200 rpm时10分钟。RNA,并在冰上被5 µL冰冷1 N NaOH碎片碎片10分钟。用25 µl 1 M Tris-HCl(pH 6.8)中和后,将RNA再次用异丙醇沉淀。Biotin RNA被预洗的dynabeads™M-280链霉亲和蛋白珠(Invitrogen,#11206D)富含,被高盐缓冲液,分别降水缓冲液,低盐缓冲液洗涤,然后用Trizol和Zymo rna Clean&Compentor(Zymoresearch(Zymoresearch)(Zymoresearch)在珠子上提取。用20°C的100 µM VRA3 RNA适配器与1 µL的100 µM VRA 3 RNA连接过夜。然后将生物素RNA富集并再次提取。RNA通过RPPH(NEB,#M0356)在5'端修饰,并通过T4 PNK(NEB,#M0201L)进行了羟基修复。被Zymo RNA清洁和浓缩器提取后
图3。DNA运输稳定缓冲液保持DNA干燥和存储在RT的功能和完整性。使用DNA运输管评估DNA干燥的完整性和功能,我们使用三种不同的条件进行了1个月的DNA多路复用PCR:在-20ºC(参考条件)(参考条件)冷冻,并在RT下干燥,具有或没有DNA运输稳定的RT。如上所示,在储存在-20ºC和RT的DNA中观察到了一个定义的17.5 kb(红色矩形),并在RT中使用DNART运输稳定稳定缓冲液,而在没有此缓冲液的RT中,DNA均显示出几乎无法检测到的17.5 kb带,表明DNA功能和整合性损失。观察到供体C和D的结果相同。
摘自Nucleospin手册:使用Nucleospin Tissue套件时,穿着合适的防护服(例如,实验室外套,一次性手套和保护性护目镜)。有关更多信息,请咨询适当的材料安全数据表(MSDS在线可在http://www.mn-net.com/msds上在线提供)。谨慎:缓冲液B3中的盐烷盐酸盐和缓冲液BW与Bleach结合使用时会形成高反应性化合物!因此,请勿将漂白剂或酸性溶液直接添加到样品制备废物中。尚未对残留的感染材料进行测试,尚未测试用Nucleospin组织试剂盒产生的废物。由于强烈的裂解缓冲液和蛋白酶K处理,用残留的传染性物质对液体废物的污染极不可能,但不能完全排除。因此,必须将液体废物视为传染性,应根据当地安全法规处理和丢弃。
Auto-Mag® DNA 片段分选纯化回收试剂(磁珠法)是一款基于顺磁珠技术开发的高性能试剂,专为满足 下一代测序 (NGS) 文库构建中的 PCR 产物、DNA 片段和 RNA 的纯化需求而设计,同时支持 DNA 片段的大 小分选与高效回收。在 PCR 产物纯化方面,该试剂提供了单管和 96/384 孔板两种灵活格式,通过优化的缓 冲液选择性地结合 >100 bp 的 PCR 扩增产物,利用简便的清洗步骤去除多余引物、核苷酸、盐和酶,最终 使用低盐洗脱缓冲液或水进行温和高效的洗脱。在 DNA 片段大小分选中,用户可通过调整试剂与 DNA 样 本的体积比,精准选择目标 DNA 片段范围,并通过结合、洗涤和洗脱的简单操作回收分布均匀、符合实验 需求的目标 DNA 片段。