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练习卷 02 (2024-25) 第 02 章 微生物
(a) 鲜牛奶在食用前要煮沸，而包装好的加工牛奶无需煮沸即可食用。 (b) 生蔬菜和水果要放在冰箱里，而果酱和泡菜可以放在室外。 (c) 虽然蚊子并不生活在水中，但可以通过防止水停滞来控制它们。为什么？ 答：(a) 鲜牛奶要煮沸以杀死牛奶中的有害微生物。包装牛奶经过巴氏杀菌，因此无需煮沸巴氏杀菌牛奶。 (b) 生蔬菜很容易被微生物感染。因此，它们需要放在冰箱里，因为低温会抑制微生物的生长。果酱和泡菜中含有糖和盐，它们可以起到防腐剂的作用。因此它们不容易被感染。 (c) 虽然蚊子并不生活在水中，但它们产卵并且幼虫在水中生长。因此，可以通过防止水停滞来控制蚊子。 12. 解释疫苗是如何起作用的。
预测疟疾传播阻断疫苗对公共卫生的影响
阻断传播疫苗正在接受早期临床试验的测试，这种疫苗可以阻断疟疾从人到蚊子的传播。这种疫苗的活性通常使用膜喂养试验来评估。要了解这种疫苗的现场效果，需要了解野生、自然吸血蚊子的感染程度，因为这表明阻断传播的难度。在这里，我们使用在布基纳法索收集的自然感染蚊子的数据，将实验室估计的活性转化为现场估计的活性。然后利用传播动力学模型来预测传播阻断疫苗与现有干预措施对公共卫生的影响。该模型表明，学龄儿童是接种疫苗的理想目标人群。疫苗接种的好处分布在整个人口中，避免了幼儿中最多的病例。将传播阻断疫苗与现有干预措施一起使用可以对疟疾产生重大影响。
数字液滴 PCR 和 IDAA 用于检测疟疾物种斯氏按蚊中的 CRISPR 插入/缺失编辑
摘要 CRISPR/Cas9 技术是设计基因驱动系统以控制和/或改变蚊媒种群的有力工具；然而，CRISPR/Cas9 介导的非同源末端连接突变可能对产生抗驱动的等位基因产生重要影响，从而对驱动效率产生重要影响。我们展示并比较了两种技术在疟疾媒介蚊子斯氏按蚊中的插入或缺失 (indel) 检测能力：扩增子分析插入缺失检测 (IDAA™) 和液滴数字™ PCR (ddPCR™)。这两种技术在含有不同比例和不同大小的插入缺失的蚊子样本中都显示出插入缺失频率的准确性和可重复性。此外，这些技术具有优势，使它们可能更适合在基因驱动蚊子的笼养试验和封闭式现场测试中进行高通量非同源末端连接分析。
2020；8：30-36。doi：10.7150/jgen.43928 研究论文利用 Cas13a 进行可编程 CRISPR 干扰，实现蚊子基因沉默
在 CRISPR-Cas 系统中，Cas13a 是一种 RNA 引导的 RNA 核酸酶，专门靶向单链 RNA。我们开发了一种 Cas13a 介导的 CRISPR 干扰工具，以靶向 mRNA 来实现蚊子的基因沉默。通过胸内注射将表达 Cas13a 的质粒递送给蚊子，递送后至少 10 天仍可检测到 Cas13a 转录本。使用 T7 RNA 聚合酶在体外合成靶向特异性 crRNA。Cas13a 质粒和靶向 crRNA 可以通过胸内注射一起递送，或者可以先提供 Cas13a 构建体，然后在适当的时候提供靶向 crRNA。在两种蚊子中测试了该机制。在冈比亚按蚊中，卵黄蛋白基因被 Cas13a/Vg-crRNA 沉默，同时伴有产卵量显著下降。在埃及伊蚊中，COPI 基因的 α 和 δ 亚基被 Cas13a/crRNA 沉默，导致死亡和中肠脆弱，重现了之前报道的表型。当提供目标 crRNA 混合物时，可以同时实现基因共沉默。研究中未观察到非目标转录本的可检测的附带切割。除了 dsRNA 或 siRNA 介导的 RNA 干扰外，可编程的 CRISPR 干扰方法提供了一种在蚊子中敲除基因的替代方法。
基因编辑揭示了疟疾媒介蚊子 Anopheles coluzzii 中 CO2 受体复合物的必需和调节成分
未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者（此版本于 2020 年 5 月 15 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.05.13.094995 doi：bioRxiv preprint
我反对 BLNR 5/10/24 议程项目 C6。这些...
2024 年 5 月 7 日 回复：反对议程项目 C-6 延长蚊子释放的证词 Aloha 主席 Chang 和土地董事会成员：作为考艾县议员，我获得了有关延长考艾岛细菌感染蚊子释放计划的更多信息，该计划将于 2024 年 5 月 10 日作为议程项目 C-6 进行讨论。虽然我曾两次签署考艾岛理事会决议支持该提案，因为我非常支持保护我们的本土森林鸟类，但我了解到了更多关于长期承诺在我们脆弱的环境中释放大量生物适应蚊子可能产生的意外后果的信息，并且对环境监测水平或我们收回决策影响的能力感到不安。在提供更多保证之前，我不再支持将沃尔巴克氏体感染的蚊子释放到我们的考艾岛森林中。请不要将合同金额翻倍至 1200 万美元，也不要将该项目延长第二年。对 C-6 投反对票。如果您有任何疑问，请随时联系我或市议会服务人员，电话：241-4188。 Mahalo，Felicia Cowden 市议员，考艾县议会 公共安全与人类服务委员会主席 公共工程与退伍军人服务委员会副主席 4396 Rice Street, Suite 209 Līhu'e, Hawai'i 96766 手机：(808) 652-4363
非洲丝状病毒载体的总微生物组，Culex Quinquefasciatus：对人类致病性MI
culex quinquefasciatus蚊子是西尼罗河病毒，登革热病毒和裂谷谷发烧病毒等人畜共患病原体的重要媒介。尽管它们在病原体传播中的作用，但对非洲这些蚊子的全面微生物组研究受到限制，大多数研究都集中在其中肠微生物组上。这项研究通过分析非洲CX的总微生物组来解决这一差距。使用元基因组下一代测序（MNGS）的Quinquefasciatus。该研究产生了71,817和29,908读，读取了CX。Quinquefasciatus和微生物分别识别146个不同的微生物。细菌是最普遍的，所有微生物的占85.6％（125/146），其次是病毒（8.2％，12/146），真菌（4.8％，7/146）和其他真核生物生物（1.4％，2/146）。经常检测到的属包括Rickettsia sp。，Wolbachia sp。，Erwinia sp。，肠球菌Sp。，Pantoea sp。和Providencia sp。Providencia rettgeri，CX的Wolbachia内共生体。Quinque fasciatus和Rickettsia tabaci的内共生体是最丰富的物种之一。值得注意的是，大约7.4％的鉴定微生物是已知的人类病原体。本研究提供了CX的微生物组的概述。quinquefasciatus，突出了共生，共生和致病性微生物，其中一些可能对微生物操纵策略控制蚊子和蚊子 - 传播病原体有用。
靶向Saglin和脂素的种群修饰基因驱动器会损害蚊子中疟原虫的传播
抽象的亲脂蛋白是一种必不可少的，高度表达的脂质转运蛋白，分泌并在昆虫血淋巴中循环。我们劫持了肛门coluzzii脂肪素基因，使其共表达了抗体2A10的单链版本，该版本结合了疟原虫疟原虫恶性疟原虫的孢子岩。所产生的转基因蚊子表明，将表达恶性疟原虫的berghei传输的能力明显降低，向小鼠表达了恶性疟原虫的p. p. p. p. purciparum purciparum purciparum purcorozoite蛋白。为了迫使这种抗菌转基因在蚊子种群中的传播，我们设计并测试了几种基于CRISPR/CAS9的基因驱动器。其中之一安装在促寄生虫基因saglin中，并裂解野生型脂素蛋白，从而导致抗癌化的修饰的脂蛋白版本与Saglin Drive一起替换野生型和搭便车。尽管产生了抗驱动器等位基因并在其GRNA编码的多重阵列中显示不稳定，但基于Saglin的基因驱动器在笼中的蚊子种群中达到了高水平，并有效地促进了抗菌性脂蛋白:: sc2a10等位基因的同时扩散。这种组合有望通过两种不同的机制减少寄生虫的传播。这项工作有助于设计新型策略，以在蚊子中传播抗疟疾转基因，并说明建立种群修饰基因驱动器时遇到的一些预期和意外的结果。
消灭疟疾：阿卜杜拉耶·迪亚巴特教授与比尔·盖茨的坦诚对话
尽管取得了这些进展，但抗击疟疾的进展却停滞不前，2022 年新增病例数与 2021 年相比增加了 500 万例。一系列因素包括：蚊子对最常见杀虫剂的抗药性、寄生虫对青蒿素类联合疗法（目前最好的药物）的抗药性、气候变化影响疟蚊的传播以及蚊子叮咬行为的改变。世卫组织指出，继续投资开发和部署新型疟疾疫苗和下一代工具将是实现 2030 年全球疟疾目标的关键。
通过 ReMOT 控制对疟蚊 Anopheles stephensi 进行 Cas9 介导的基因编辑
摘要 创新工具对于推进疟疾控制至关重要，并且取决于对疟蚊传播疟原虫的分子机制的理解。基于 CRISPR/Cas9 的基因破坏是一种揭示媒介-病原体相互作用的潜在生物学原理的有效方法，其本身可以成为蚊虫控制策略的基础。然而，用于对蚊子（尤其是疟蚊）进行基因改造的胚胎注射方法既困难又低效，特别是对于非专业实验室而言。在这里，我们采用了 ReMOT 控制（受体介导的卵巢货物转导）技术，将 Cas9 核糖核蛋白复合物递送至成年蚊子卵巢，从而无需注射胚胎就在疟疾媒介斯氏疟蚊中产生有针对性的可遗传突变。在疟蚊中，ReMOT 控制基因编辑与标准胚胎注射一样有效。 ReMOT 控制对按蚊的应用，为缺乏设备或专业知识进行胚胎注射的疟疾实验室揭示了 CRISPR/Cas9 方法的威力，并建立了 ReMOT 控制对不同蚊子物种的灵活性。