总而言之,该研究涉及对能够分离和鉴定短核酸片段(尤其是治疗性寡核苷酸)的高级色谱方法的紧迫需求。通过使用C18AR色谱柱进行系统评估,具有不同基序和序列组成的寡核苷酸,以及模仿序列杂质的掺入,可以增强可用的分析工具,以确保基于核酸酸的治疗剂的质量和安全性。
22/224 * NIBSC(MHRA),英国AS448 TGA,澳大利亚H1-AB-2214 CBER/FDA,美国 *蓝色ERLS中显示的新试剂,用于试剂订单/信息:cbershippingrequests@fda.hhs.hhs.hhs.hs.hs.hs.gov nibsc.nibsc.nibsc.nibsc. niID:flu-vaccine@nih.go.jp tga:threnza.reagents@health.gov.au用于其他候选疫苗病毒和效力测试试剂,请访问https://www.who.who.who.who.who.teams/global-inteams/global-influenza-candidation for for一般查询,请联系gisrs-whohq@who.int
AS445 TGA,澳大利亚 2023AH3-1* NIID,日本 *新试剂以蓝色显示 上述效力测试试剂是在制造商支持下开发的,并由全球流感监测和应对系统 (GISRS) 的世卫组织基本监管实验室 (ERL) 校准。有关试剂订单/信息的 ERL 联系方式: CBER:CBERshippingrequests@fda.hhs.gov MHRA:standards@nibsc.org 或 enquiries@nibsc.org NIID:flu-vaccine@nih.go.jp TGA:influenza.reagents@health.gov.au 有关其他候选疫苗病毒和效力测试试剂,请访问 https://www.who.int/teams/global-influenza-programme/vaccines/who-recommendations/candidate-vaccine-viruses 如有一般咨询,请联系 gisrs-whohq@who.int
o布拉德福德测定法:库马西亮蓝色G-250染料试剂。o用于BCA测定:BCA试剂A和B,CUSO₄解决方案。o用于洛瑞测定法:碱性铜试剂,叶核酸试剂。o用于紫外线吸收:磷酸盐缓冲盐水(PBS)或其他合适的缓冲液。4。微板读取器或分光光度计5。移液器和移液器提示6。测试管或微板井7。卧式(用于UV吸收方法)8。Vortex Mixer 9。孵化器(对于某些测定)10。蒸馏水
4制造商可以在与相关OMCL的讨论和同意之后,由TGA,澳大利亚和美国CBER制备的试剂用于标准化,并提供整个生产活动相同的试剂。5有关试剂开发的可用性和进度,请咨询以下网站:http://www.nibsc.org/science_and_research/virology/influenza_resource_/full_reagent_update.aspx https://www.who.int/teams/global-influenza-progmmeme/vaccines/who-recommendations/candidate-vaccine-viruses
图1。在去除RNase和dNase中,MP生物医学Nuc-Off核酸酶和DNA去除喷雾剂和竞争者T溶液的性能比较。A. RNase消除。在室温下孵育5分钟,将4μl的去除试剂和不同量的RNase(以1μl为单位)的混合物孵育;之后,加入1μlRNA,并在室温下进一步孵育15分钟,然后在含有甲醛的琼脂糖凝胶中变性和最终混合物的电泳。B. DNase消除。在室温下孵育4μl的去除试剂和不同量的DNase(以1μl)的混合物5分钟;之后,将1μl10X反应缓冲液和1μgDNA和无核酸酶的水加入总体积10μl,并在室温下进一步孵育15分钟,然后是最终混合物的琼脂糖凝胶电泳。C.去除试剂对DNA稳定性的影响。在室温下孵育15分钟,将4μl的去除试剂和1μl基因组DNA的混合物进行孵育,然后通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。D.去除试剂对RNA稳定性的影响。在室温下孵育4μl的去除试剂和1μlRNA的混合物,然后变性添加含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳。此处显示的图仅供参考,它可能会根据不同的实验条件而有所不同。
嘌呤和嘧啶的气相色谱分析已经完成,但是它们的挥发性和热稳定性不足以从气相色谱柱中洗脱出来。在气相色谱分析之前,需要用合适的试剂进行衍生化。使用的试剂例如双(三甲基硅基)三氟乙酰胺[12-15],五氟苯甲酰氯,五氟苯磺酰氯或七氟丁酸酐[16],N,N-叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺[13]和N-(叔丁基二甲基硅基)N-甲基三氟乙酰胺[14]。虽然用不同的硅基试剂进行衍生化虽然有效,但需要非水介质进行衍生化。简单且廉价的试剂可以在水相中使用,可能对嘌呤和嘧啶的气相色谱测定有价值。氯甲酸乙酯已被用作水-有机相中的衍生试剂,用于气相色谱测定胺和氨基酸 [17]。Husek 报道了氯甲酸酯作为气相色谱通用试剂的应用 [18],Simek 和 Husek 报道了烷基氯甲酸酯作为酯化试剂的应用 [19]。已经使用氯甲酸酯对多种氨基化合物进行了气相色谱分析 [20]。
图1。在去除RNase和dNase中,MP生物医学Nuc-Off核酸酶和DNA去除喷雾剂和竞争者T溶液的性能比较。A. RNase消除。在室温下孵育5分钟,将4μl的去除试剂和不同量的RNase(以1μl为单位)的混合物孵育;之后,加入1μlRNA,并在室温下进一步孵育15分钟,然后在含有甲醛的琼脂糖凝胶中变性和最终混合物的电泳。B. DNase消除。在室温下孵育4μl的去除试剂和不同量的DNase(以1μl)的混合物5分钟;之后,将1μl10X反应缓冲液和1μgDNA和无核酸酶的水加入总体积10μl,并在室温下进一步孵育15分钟,然后是最终混合物的琼脂糖凝胶电泳。C.去除试剂对DNA稳定性的影响。在室温下孵育15分钟,将4μl的去除试剂和1μl基因组DNA的混合物进行孵育,然后通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。D.去除试剂对RNA稳定性的影响。在室温下孵育4μl的去除试剂和1μlRNA的混合物,然后变性添加含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳。此处显示的图仅供参考,它可能会根据不同的实验条件而有所不同。
该套件包含足够的试剂,可以生产16个独特的下一代测序aTacseq库。该套件中的试剂具有多种存储温度。ATAC -SEQ套件在两个温度下运输,在干冰上有一个盒子,将组件存储在-20°C下,第二个盒子在室温下存储在4°C下的组件。请根据以下存储条件存储组件。正确存储后,所有试剂均可自从收到之日起6个月稳定。