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病原体核酸和内部控制的检测是通过使用针对每个分子靶标(荧光标记的寡核苷酸)的特异性水解探针,在多重反应中进行的。对于所研究的分子靶点,生成具有典型形状的扩增曲线表明该样品发生了可检测结果的反应。对于所研究的分子靶点结果无法检测的样本,应该只呈现 IC 的扩增。 CI扩增不仅能反映样本DNA的质量,还能表明反应(试剂和操作者)的正常进行。如果未检测到 CI,则必须再次提取样本的遗传物质。该试剂盒具有生物安全的合成阳性对照 (CP)(不会对操作者或环境造成生物风险),其必须对所研究的所有分子靶标(包括 IC)呈现可检测的结果。该试剂盒还具有阴性对照 (NC),用于评估环境和实验条件,并且必须对所有调查目标(CI 除外)呈现不可检测的结果。该试剂盒专为进行定性概况分析而开发,即它仅评估分子目标的存在或不存在。该产品尚未经过定量分析验证。产品已验证可与以下热循环仪一起使用:7500 实时 PCR 系统 (Applied Biosystems) 和 CFX96 实时 PCR 检测系统 (Bio-Rad)。
1。Introduction .............................................................................................................................1
•所有样品必须视为潜在的生物危害。戴上适当的防护眼镜,衣服和手套。•避免与套件试剂直接接触皮肤。如果接触,请立即用水彻底洗涤。•最小化化学物质的吸入。请勿打开化学容器。•出于安全原因,应在设备齐全的设施中进行所有工作(即物理控制设备)。•在使用潜在的传染性材料之前,应根据公司/机构的相关法规和要求对个人进行培训。
图 1. 有效去除宿主基因组 DNA,同时不降低噬菌体 DNA 产量。使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从四种富集噬菌体培养物中分离总 DNA。在添加提供的裂解缓冲液之前进行 DNase I 预处理。简而言之,将 20 单位 DNase I 添加到 1 mL 富集噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育 20 分钟。DNAase I 处理后,按照程序进行。作为对照,使用 Norgen 的噬菌体 DNA 分离试剂盒从相同 4 种培养物的等分试样中分离 DNA,而无需进行 DNase I 处理。对于 DNA 分析,将每 50 µL 洗脱液中的 10 µL 上样到 1X TAE 琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体 DNA 被其外壳蛋白安全地保护起来,免受 DNase I 处理的影响,而宿主基因组 DNA 则被 DNase I 有效降解。因此,DNase I 预处理导致最终噬菌体洗脱中宿主 gDNA 污染较少,而不会影响总噬菌体 DNA 产量。M 号泳道为 Norgen 的 Highranger 1 kb DNA Ladder(货号 11900)
• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(Takara Bio,目录号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,目录号 635013)用于对额外的板进行分类
注 1:如何进行双等位基因敲除:如果您只有单等位基因敲除(杂合子)并且想要获得双等位基因敲除(纯合子),您可以订购另一个包含不同哺乳动物选择标记(如杀稻瘟素或新霉素抗性标记)的供体载体。OriGene 拥有两种功能性盒。您可以使用新的供体载体再次进行敲除程序以靶向第二个等位基因,因为一个等位基因已被靶向并被 GFP-puro 盒替换。或者,您可以使用 Cre(SKU GE100018)从您编辑的细胞中去除 puro 盒,并使用相同的供体载体靶向第二个等位基因。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。
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sCelLiVE 组织保存液可有效模拟生理环境,确保 72 小时内细胞保持高活力(图 2,左)。最终的基因表达模式不受影响(图 2,右)。无需添加常用于防止 RNA 降解的固定剂或稳定剂。高细胞活力确保对所有类型的细胞都能进行正确分析,即使是易降解的细胞(例如中性粒细胞)或来自少量样本的细胞。