CRISPR 与基于标记的方法的比较......
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摘要:随着近年来人们对使用溶菌噬菌体作为治疗剂的兴趣日益浓厚,迫切需要了解它们的基本生物学,以便对其基因组进行工程改造。目前的噬菌体工程方法依赖于同源重组,然后通过选择系统来识别重组噬菌体。对于 T7 噬菌体,宿主基因 cmk 或 trxA 已被用作选择机制,以及 I 型和 II 型 CRISPR 系统,以对抗野生型噬菌体并富集所需的突变体。在这里,我们系统地比较了这三个系统;我们表明使用基于标记的选择是最有效的方法,我们使用这种方法来生成多个 T7 尾纤维突变体。此外,我们发现在噬菌体 T7 的工程改造中,II 型 CRISPR-Cas 系统比 I 型系统更易于使用,并且通常更有效。这些结果为未来更有效地改造噬菌体 T7 奠定了基础。

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