为了确定T-DM1的DAR,使用Zenotof 7600系统进行了糖基化和去糖基化形式的完整质量测量。在高分辨率TOF MS光谱中观察到了两种形式的T-DM1的复杂电荷状态分布(图2A和2D)。来自生物制剂Explorer软件的完整蛋白反向溶液的结果表明,糖基化的T-DM1的复杂MS谱由不同的Glycoforms组成,这些糖基型(包括G0F,G1F和G2F)(与多达8个分子的有效载荷DM1(图2B和图2B和2B和2C)相结合。通过比较,去除N连接的糖基化导致了更简单的MS曲线(图2D – F),其中检测到携带8 dm1的脱脂化T-DM1。用<10 ppm的质量精度鉴定了两种形式的T-DM1形式,并通过Biologics Explorer软件自动集成。图3显示了T-DM1的糖基化和退化形式的DAR分布。在这两种情况下,主要的T-DM1物种的DAR值为2-4(图3)。
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