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设计RT-QPCR分析时，重要的是决定是使用总RNA还是纯化的mRNA作为逆转录模板。mRNA可能会提供更多的敏感性，但是通常使用总RNA，因为它比mRNA具有重要的优势作为起始材料。首先，需要更少的纯化步骤，这确保了模板的更定量恢复，并且可以更好地将结果标准化为单元格的起始数。第二，通过避免任何mRNA富集步骤，人们避免了由于不同mRNA的回收率不同而导致结果偏斜的可能性。总的来说，在大多数情况下，总RNA更适合使用，因为对大多数应用的相对量化比检测的绝对敏感性更重要。
基因表达分析通过定量...
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