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优化农杆菌介导的大豆毛状根体外和体外转化，以便使用可视化方法筛选转化子
体外和体外农杆菌介导的毛状根转化 (HRT) 测定是植物生物技术和功能基因组学工具包的关键组成部分。在本报告中，使用 RUBY 报告基因优化了大豆的体外和体外 HRT。评估了不同的参数，包括农杆菌菌株、细菌细胞培养物的光密度 (OD 600 )、共培养基、大豆基因型、外植体年龄以及乙酰丁香酮的添加和浓度。总体而言，就毛状根和转化根（表达 RUBY ）的诱导百分比而言，体外测定比体外测定更有效。尽管如此，体外技术被认为更快且方法更简单。在 cv 的 7 天大子叶上观察到了 RUBY 的最高转化。 Bert 用 R1000 接种 30 分钟，R1000 悬浮在 ¼ B5 培养基中，OD 为 600 (0.3)，乙酰丁香酮含量为 150 µM。该测定的参数还通过两步体外毛状根转化获得了最高百分比的 RUBY。最后，使用基于机器学习的建模，进一步确定了两种测定的最佳方案。本研究建立了适用于大豆功能研究的高效可靠的毛状根转化方案。
微粒介导的 CRISPR DNA 递送用于杨树基因组编辑
目前，CRISPR/Cas9 的使用是植物（包括生物量作物杨树）精确基因组工程的首选方法。在杨树中传递 CRISPR/Cas9 及其成分的最常用方法是通过农杆菌介导的转化，除了所需的基因编辑事件外，还会导致稳定的 T-DNA 整合。在这里，我们探索了通过 DNA 包被的微粒轰击将基因编辑试剂传递到模型树 Populus tremula x P. alba 中，以评估其开发无转基因、基因编辑树的潜力，以及其在特定靶位整合供体 DNA 的潜力。使用优化的转化方法，有利于再生暂时表达所传递供体 DNA 上基因的植物，我们再生了不含 Cas9 和抗生素抗性编码转基因的基因编辑植物。此外，我们报告了供体 DNA 片段在 Cas9 诱导的双链断裂处频繁整合，为靶向基因插入提供了机会。
巨细胞病毒特异性细胞介导的免疫状态...
众所周知，宿主对CMV感染的免疫反应主要由细胞介导的免疫（CMI）介导，并且CMI会限制CMV感染重新激活的风险。对CMV的免疫缺陷或该生物的原发性感染或继发感染是导致先兆子痫中CMV感染的发育或重新激活的原因，目前尚不清楚。Quantiferon -CMV（QF -CMV）测试是一种识别CMV特异性CD8+ T细胞患者的体外方法。在该测定中，评估了主要由CMV抗原刺激的CD8+ T细胞产生的特定干扰素− -Gamma（IFN -γ）。[13,14]值得注意的是，此方法对CMI监测的准确性和功效已被证实。[15,16]据我们所知，这项调查是评估CMV相关的CMI和先兆子痫之间的关联的首次尝试。然而，调查调查调查CMV感染与先兆子痫之间的关系导致数据矛盾。
文章标题：综述：真菌细胞中 CRISPR/Cas12 介导的基因组编辑：植物真菌病理学的进展、机制和未来方向
文章标题：综述：真菌细胞中的 CRISPR/Cas12 介导的基因组编辑：植物真菌病理学的进展、机制和未来方向 作者：Chiti Agarwal[1] 所属机构：华盛顿州立大学 [1] Orcid ids：0000-0003-4125-2880[1] 联系电子邮件：chiti.agarwal@gmail.com 许可信息：本作品已根据知识共享署名许可 http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ 以开放获取的方式发表，允许在任何媒体中不受限制地使用、分发和复制，只要对原始作品进行适当的引用。条件、使用条款和出版政策可在 https://www.scienceopen.com/ 上找到。预印本声明：本文为预印本，尚未经过同行评审，正在考虑并已提交给 ScienceOpen Preprints 进行开放同行评审。 DOI：10.14293/PR2199.000129.v2 预印本首次在线发布时间：2023 年 6 月 8 日 关键词：CRISPR、CRISPR/Cas12、真菌病原体、植物病原体
微生物共生介导的生态进取
摘要 在现代农业系统中，农药使用是农田中最常见的做法，其中 2%–3% 的农药被使用，其余的残留在土壤和水中，造成环境污染并产生毒性 (WHO，1990。饮食、营养和慢性疾病预防，797 页)。农药残留物留在土壤表层，导致土壤-水环境毒性。绝大多数印度人口 (56.7%) 从事农业，因此接触到农业中使用的农药。此外，农药的微生物降解对现代农业及其环境影响至关重要。微生物几乎占据了地球上的每个栖息地，它们的活动在很大程度上决定了当今世界的环境条件。事实上，它们深度参与生物地球化学、金属沉淀、水净化和植物生长的维持，确保碳和氮等元素的循环利用。在土壤中，微生物与植物根部相互作用，根部是微生物活动的“热点”，微生物数量、微生物相互作用和基因交换增加。在植物根部，一个环绕植物根部并受植物根部影响的狭窄土壤区域称为根际，是大量微生物和无脊椎动物的家园，被认为是地球上最具活力的界面之一。根际微生物组取决于植物基因型、根系分泌物和环境。因此，研究受农药污染和未受农药污染的根际微生物群落表达情况，对于探究微生物在各自生态位中发挥的不同作用以及确定微生物遗传潜力在农药生物修复中的生物技术应用至关重要，包括但不限于：制药、诊断、废物处理和可再生能源发电。
CRISPR/CAS9介导的洋葱中植物去饱和酶基因的编辑（Allium Cepa L.）
结果和讨论：在总共617个共培养Calli中，21（3.4％）再生芽表现出三种不同的表型：白化，嵌合和浅绿色；与野生型非转化的再生芽相比。在白化芽中，总叶绿素含量大大降低，并且在嵌合芽中显着降低。在六个CAS9基因确认的再生芽中，两种芽表现出由于插入/缺失（Indels）和ACPDS靶点位置和周围的基于替代的突变而引起的白化表型。深度扩增子测序显示两个SGRNA之间的indel频率显着，范围从1.2％到63.4％，以及53.4％的替代频率。ACPDS基因的突变产生了可检测到的白化病表型，因此确定了ACPDS基因的成功编辑。这是第一次在洋葱中成功建立了CRISPR/CAS9介导的基因组编辑方案，而ACPD基因作为一个例子。这项研究将为研究人员提供进一步的洋葱基础研究和应用研究的必要动力。
通过耗散确定的镁介导的量子耦合...
疫苗是最有价值的人类健康技术之一。从18世纪的爱德华·詹纳（Edward Jenner）对Cowpox进行的Variolation实验，再到乔纳斯·萨克（Jonas Salk）开发脊髓灰质炎的整个病原体疫苗的努力，疫苗研究产生了一些历史上最重要的医疗突破。疫苗刺激针对特定病原体的免疫反应，它必须包含与该病原体有关的抗原。第一代疫苗通常由活或灭活的整个病原体组成。尽管其历史上的成功并广泛采用，但整个病原体疫苗在包含无关紧要的和潜在有害的病原体成分时仍引起了安全问题。他们也可以复制或恢复为致病形式（1）。亚基疫苗仅包含刺激免疫反应所需的病原体的最小成分，例如重组蛋白。这些技术改善了疫苗的安全性（2）。然而，在刺激免疫反应时，亚基疫苗本质上比整个病原体疫苗的效力较低。由于这种限制，它们通常包含额外的免疫刺激分子（称为佐剂）来发展保护性免疫（2）。其他最近的疫苗技术包括病毒载体和基于核酸的疫苗，该疫苗编码致病性抗原
通过组胺刺激介导的碳酸酐酶12和碳酸氢盐转运蛋白的运输
抽象的碳酸酐酶12被认为是癌细胞中的致癌和酸性微环境因子。为了验证组胺信号作为抗癌信号的作用，我们确定了CA12及其相关的碳酸氢盐转运蛋白的作用。在这项研究中，组胺刺激介导了CA12在肺癌细胞中的错误定位。组胺受体激活介导的Ca12内吞作用和pH值通过CAMKII抑制恢复。CA12相关的AE2表达增强了，而NBCN1表达及其活性通过组胺刺激降低。组胺受体激活介导的酸化是通过内部化的CA12和NBCN1诱导的，同时通过增强的AE2表达来增加碳酸氢盐外排。抑制bafilomycin对蛋白质运输的抑制作用恢复了Ca12和AE2局部性，并减少了细胞酸中毒。因此，我们验证了组胺刺激诱导的酸性场景 - 揭示了CA12及其相关的碳酸氢盐转运蛋白在肺癌细胞中的运输及其相关的碳酸氢盐转运蛋白及其失调的pH调节可能与组胺信号信号介导的介导的抗癌抗癌过程有关。
细胞囊泡介导的胰岛和糖尿病的胰岛间的互块
糖尿病（DM）是一种全身代谢疾病，具有高死亡率和发病率。细胞外囊泡（EV）已成为一种新型的信号分子，生物标志物和治疗剂。EVs-mediated intercellular and interorgan crosstalk of pancreatic islets plays a crucial role in the regulation of insulin secretion of b -cells and insulin action in peripheral insulin target tissues, maintaining glucose homeostasis under physiological conditions, and it ' s also involved in pathological changes including autoimmune response, insulin resistance and b -cell failure associated with DM.此外，EV可以作为生物标志物和治疗剂，分别反映了胰岛的状态并提高功能和生存能力。在这篇综述中，我们提供了电动汽车的概述，讨论了在生理和糖尿病条件下的EVS介导的胰岛的细胞间和跨组织串扰，并总结了电动汽车在DM诊断和处理中的新兴应用。对胰岛介导的EVS介导的胰岛间和实体间交流的更好理解将扩大和丰富我们对生理稳态维持以及DM的开发，诊断和治疗的了解。