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World File Search System剪接体
人类剪接体的定向高通量诱变揭示了其体内工作原理
剪接体是一种极其复杂的机器，在人类中由 5 种 snRNA 和 150 多种蛋白质组成。我们扩展了单倍体 CRISPR-Cas9 碱基编辑以靶向整个人类剪接体，并使用 U2 snRNP/SF3b 抑制剂 pladienolide B 研究了突变体。超敏替换定义了含有 U1/U2 的 A 复合物中的功能位点，但也定义了在 SF3b 解离后的第二化学步骤中起作用的成分中的功能位点。可行的抗性替换不仅映射到 pladienolide B 结合位点，还映射到 SUGP1 的 G-patch 结构域，该结构域在酵母中缺乏直系同源物。我们使用这些突变体和生化方法将剪接体解离酶 DHX15/hPrp43 鉴定为 SUGP1 的 ATPase 配体。这些数据和其他数据支持一种模型，即 SUGP1 通过在动力学阻滞下触发早期剪接体分解来促进剪接保真度。我们的方法为分析人类细胞中必不可少的机器提供了一个模板。
1 PP2A 抑制指示剪接体磷酸化……
。CC-BY 4.0 国际许可，根据 提供（未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2023 年 7 月 13 日发布。；https://doi.org/10.1101/2023.07.12.548685 doi：bioRxiv 预印本
通过RBM39降解靶向剪接体会导致高风险神经母细胞瘤模型的出色响应
异常的替代前MRNA剪接在MYC驱动的癌症中起关键作用，因此可能代表了治疗性脆弱性。在这里，我们表明神经母细胞瘤是一种以剪接失调和剪接依赖性为特征的MYC驱动的癌症，需要剪接因子RBM39才能存活。indisulam是一种“分子胶”，其选择性地将RBM39募集到CRL4-DCAF15 E3 E3泛素连接酶以用于蛋白酶体降解，对神经母细胞瘤具有高效的有效性，导致在多种高风险疾病模型中导致无效的无毒性毒性，导致显着反应。遗传耗竭或Indisulam介导的RBM39降解可引起明显的全基因组剪接异常和细胞死亡。从机械上讲，DCAF15对RBM39和高级表达的依赖性决定了神经母细胞瘤对indisulam的精致灵敏度。我们的数据表明，通过精确抑制神经母细胞瘤的脆弱性RBM39来靶向失调的剪接体是一种有效的治疗策略。