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World File Search System质粒
应用音符 - 质量质粒-DNA-PURIFECTION。 ...
在此应用中，pDNA细胞裂解物在超滤步骤中首先浓缩10倍。然后，用Tris-Edta（TE）缓冲区完成了透明缓冲区的交换。这种UF/DF工艺历史上是使用堆叠的盒式盒子进行的，该盒子具有1.5 m 2的总有效过滤区域（EFA）。Seprapor®空心纤维进行小尺度（0.023 m 2）实验进行评估，然后按缩放到生产运行（0.4，0.8 m 2）。将此UF/DF过程与历史处理条件与盒式录音带进行比较，突出了UFSeprapor®空心纤维过滤器的几种处理优势，以纯化PDNA的TFF纯化。
君主质粒小型套件T1010手册
产品名称：BSRGI-HF®目录编号：R3575S浓度：20,000 U/ml单位定义：一个单位定义为在50°C的总反应量中，在37°C的1小时内，在1小时内，在Rcutsmart的lambda DNA中消除1 µg lambda DNA所需的酶量。包装批号：10273566到期日期：09/2026储存温度：-20°C存储条件：10 mm Tris-HCl，50 mm NACL，1 mm DTT，0.1 mm EDTA，0.1 mm EDTA，50％甘油，50％甘油，50％甘油，200 µg/ml ralbumin（200 µg/ml ralbumin（ph 7.4 l @ 25°cy/l vy/ps）
通过克隆和质粒介导的Blaoxa-48基因在法国南部的胸腔和质粒介导的传播中，在胸腔肿瘤单元中爆发了甲状腺苯甲酸的肠杆菌
碳青霉烯是广谱抗生素，在治疗由革兰氏阴性细菌引起的严重感染中起主要作用。碳青霉烯型肠杆菌科的全球传播正在成为一个公共卫生问题（Jamal等，2020）。肠杆菌科中碳青霉烯耐药性的升高主要是由于获得了碳青霉烯 - 氢化酶（Carbapenemases）（Tilahun等，2021）。编码碳青霉酶的基因可以掺入细菌染色体中，但主要位于移动元素上，例如在细菌菌株和物种之间可转移的质粒或转座子（San Millan，2018年）。因此，临床暴发通常很复杂，涉及克隆，质粒或转座子的基因传播的各种因素（Brehony等，2019）。碳青霉素型OXA-48首次出现在2000年代中期，此后在许多欧洲国家和世界各地都发现了（Hidalgo等，2019）。在法国，它是产生甲状腺素酶的肠杆菌科（CPE）中最常见的酶（Emeraud等，2020）。BLA OXA-48基因被认为源自环境Shewanella菌株的染色体（Tacão等，2018）。它在物种之间的快速传播是由于其在转座子中筑巢（TN 1999），该转座主要由含有/M型质粒携带（Shankar等，2020）。控制医院病房中的暴发是必要的，以限制多药耐药细菌的传播。CPE对患者的定殖可以干扰适当的护理。fmt是CPE定殖也可能影响癌症患者化学疗法的开始，因为它与接受诱导化疗的患者的存活率较低有关（Ballo等，2019）。因此，已经实施了一种恢复健康的肠道菌群并消除CPE储层（例如粪便菌群移植（FMT））的策略。
优化的质粒式骨架可有效RAAV制造
重组腺相关病毒（RAAV）是用于传递遗传信息的最深入研究和最广泛使用的载体之一。但是，将遗传货物向受体细胞有效地转移需要高矢量剂量。质粒DNA（pDNA）是用于制造Raav的关键原料。可以生产的病毒滴度取决于辅助，包装和转移质粒转染的细胞数量以及其生物学活性。因此，对优化质粒的高级疗法需求的开发和应用表现出较高的生物学活性，可以以高质量和数量生产。这些原材料的可用性和负担能力反过来要求高性能生产过程，这些过程的特征是高产品滴度，质粒DNA纯度和可伸缩性。这些特征受到靶质粒的特定序列的影响，尤其是那些对RAAV功能至关重要的序列。Wacker开发了一个专有的饲料批次工艺，该过程最佳地支持了质膜菌株的生长，并允许最佳的质粒复制。此过程允许在高特异性滴度和高纯度下进行可扩展的质粒DNA（包括关键的RAAV制造原材料）的可扩展生产和隔离。使用此过程，我们开发了特定的DNA序列，从而进一步提高了靶质粒的生产率，从而降低了制造成本。并行，我们筛选替代质粒结构，以提高其转染效率和包装细胞系中的生物学活性。结合了由此产生的技术，我们开发了专有质粒，可以进一步促进RAAV制造。具有其生产力，灵活性和可扩展性，Plasmitec®制造平台提供了高质量且负担得起的原材料，因此是开发和应用高级疗法的宝贵促进者。
通过AMP编码质粒引起的免疫力无法增加对欧洲海鲈鱼侵害诺达病毒的保护
抗菌肽（AMP）是先天免疫系统的有效臂，可以直接杀死病原体并诱导免疫调节。在海洋水产养殖中，欧洲鲈鱼（Dicentrarchus labrax L.）是最繁荣的物种之一，但对诺达病毒（NNV）非常容易受到影响，该物种在幼虫和少年阶段产生高死亡率。因此，我们旨在评估AMP是否在鲈鱼中发挥免疫调节性和/或NNV预防作用。To do this, plasmids encoding the sea bass AMPs dicentracin (pDIC), beta- defensin (pDB1), hepcidin (pHAMP2) or NK-lysin (pNKL) were generated and intramuscularly injected into sea bass juveniles to evaluate their immunomodulatory and anti-NNV roles.海低音肌肉转录AMP，并产生循环水平的增加，并增加抗菌活性。免疫相关的基因分析表明，在注射部位，炎症反应的激活和嗜中性粒细胞的募集。然而，AMP编码的质粒，即Phamp2，通过增加鱼类死亡率对NNV疾病的负面影响。总而言之，编码AMP的质粒显示出对欧洲鲈鱼的免疫刺激作用，但不能提高对NNV的抗性。
双质粒诱导型 CRISPR-Cas9 系统在拜氏梭菌中的改造及应用
CRISPR 技术的最新发展为改进梭菌属专用的基因组编辑工具开辟了新的可能性。在本研究中，我们改进了基于该技术的双质粒工具，以便对产生丙酮/丁醇/乙醇 (ABE) 或异丙醇/丁醇/乙醇 (IBE) 混合溶剂的两种拜氏梭菌参考菌株的基因组进行无瘢痕修饰。在 NCIMB 8052 ABE 生产菌株中，SpoIIE 孢子形成因子编码基因的失活导致孢子形成缺陷的突变体，并且通过用功能性 spoIIE 基因补充突变菌株可以恢复此表型。此外，将真菌纤维素酶编码 celA 基因插入拜氏梭菌 NCIMB 8052 染色体中，产生具有内切葡聚糖酶活性的突变体。接下来，我们采用类似的双质粒方法对天然 IBE 产生菌株 C. beijerinckii DSM 6423 的基因组进行编辑，该菌株此前从未进行过基因工程改造。首先，删除赋予甲砜霉素抗性的 catB 基因，使该菌株与我们的双质粒编辑系统兼容。作为概念验证，我们在 C. beijerinckii DSM 6423 Δ catB 中使用了我们的双质粒系统，以去除内源性 pNF2 质粒，从而大幅提高转化效率。
非洲猪瘟病毒质粒库 - CGSpace
非洲猪瘟病毒 (ASFV) 是一种大型、复杂的 DNA 病毒，属于 Asfarviridae 科，可引起非洲猪瘟 (ASF)，这是一种影响家猪和野猪种群的高致命疾病，死亡率高达 100%。这种疾病最初在非洲和撒丁岛流行，现已蔓延至全球，造成重大经济损失。尽管进行了广泛的研究，但全球尚未有有效的 ASFV 商业疫苗，这促使人们继续努力了解该病毒的遗传和功能特性。质粒是一种小的环状 DNA 分子，通过实现克隆、基因表达和蛋白质生产，在研究中发挥着至关重要的作用。本报告介绍了 ASFV 质粒库和相应数据库的开发，以支持 ASF 疫苗开发、基因功能分析和蛋白质表征方面的研究工作。该库包含编码 161 个 ASFV 开放阅读框 (ORF) 的质粒，这些质粒在 CMV 启动子的控制下克隆。质粒库有助于抗原筛选和功能测定，质粒内的限制酶位点可用于克隆和表达研究，确保 ASFV 研究的多功能性和可重复性。该质粒库的开发是加速 ASF 疫苗研究和推进分子研究的重要资源。它还为其应用于其他微生物奠定了基础，增强了其在更广泛的传染病研究中的实用性。
使用移动、广泛的宿主去除 AMR 质粒
抗菌素耐药性 (AMR) 基因广泛传播于质粒上。因此，旨在阻断质粒吸收和转移的干预措施可能会抑制 AMR 的传播。先前的研究已使用基于 CRISPR-Cas 的技术从目标细菌中去除编码 AMR 基因的质粒，使用通常宿主范围较窄的噬菌体或质粒递送载体。为了使该技术可用于从复杂微生物群落的多个成员中去除 AMR 质粒，需要一种高效、宿主范围广的递送载体。我们设计了宿主范围广的 IncP1 质粒 pKJK5 来编码被编程为靶向 AMR 基因的 cas9。我们证明所得质粒 pKJK5::csg 能够阻断 AMR 质粒的吸收并去除大肠杆菌中的常驻质粒。此外，由于其广泛的宿主范围，pKJK5::csg 成功阻断了一系列环境、猪和人类相关大肠杆菌分离株以及两种假单胞菌分离株中的 AMR 质粒摄取。这项研究坚定地确立了 pKJK5::csg 是一种有前途的广泛宿主范围 CRISPR-Cas9 递送工具，用于去除 AMR 质粒，它有可能应用于复杂的微生物群落，以从广泛的细菌物种中去除 AMR 基因。
污染与腺相关病毒基因治疗后肝组织中存在的制造质粒和破坏的载体基因组
a）pa的肝活检显示出明显的外围和小叶infmmaɵon以及界面infmmaɵon（*）;存在许多带有气囊的肝细胞（**）。A中的盒子在B中被放大。b）气囊肝细胞的高亮片highlighɵngngngngngngngngngngngngngng。c）rna原位杂化剂检测到smn1基因在球囊核细胞核中显示出强烈的红色信号，该肝细胞被严重的免疫细胞隔开（*）。盒在D中被放大。d）气囊肝细胞的高亮纤维显示了核中的posiɵve信号，并在肝细胞和免疫细胞（*）的肝细胞胞质中具有轻度至中度的，标点的信号。免疫组织化学div>肝脏中的炎症表现为div>通过免疫组织化学CD4（E），CD8（F）和CD20（G）显示。bar，A和C，400微米，B，60微米，D，100微米，E-G，300微米。
forprepreptm质粒提取MIDI套件用户手册
7。加入8毫升冰冷的PM3缓冲液，并通过将管反转10到15次中和裂解物，立即混合。（不要涡旋！）- 注：•确保培养细胞的密度最佳，缓冲液体积（PM1，PM2，PM3）应与培养体积成比例地增加。（ex。培养体积，60〜120 ml：PM1，8 ml; PM2，8毫升; PM3，8 ml培养体积，120〜240 ml：PM1，16 ml; PM2，16毫升； PM3，16毫升）•处理120〜240 ml细菌时，需要额外的PM1，PM2和PM3的缓冲液体积时，可以单独购买缓冲液。•确保将细胞颗粒完全悬浮在缓冲液PM1中。•添加缓冲液PM2和缓冲液PM3后，完全混合样品混合物。通过离心8。在4°C下以≥5,000xg的距离离心20分钟。（最好在4°C下以15,000〜20,000 xg离心15分钟）。- 如果上清液仍包含悬浮物，则将上清液转移到干净的离心管上，然后重复此离心步骤。质粒的结合9。将上清液从步骤8传递到平衡的PM MIDI列。让其通过重力流动到PM MIDI柱并丢弃滤液。WASH PM MIDI第10列。通过施加12.5 mL PW缓冲液洗涤PM MIDI柱。允许PW缓冲液通过重力流量流经PM MIDI柱并丢弃滤液。