15. 将 Matrigel 包被的培养板和 hiPSC 培养基预热至 20-25 C。16. 从预包被的培养板中吸出 Matrigel 并加入 hiPSC 培养基(6 孔板每孔 2 ml)。17. 将 9 ml hiPSC 培养基加入到 15 ml 离心管中。18. 将低温小瓶直接转移到 37 C 水浴中并观察解冻过程。当管中大部分内容物解冻并仅剩下一小块冰时,迅速取出并用 70% 乙醇彻底清洗。19. 小心地将细胞逐滴转移到准备好的带有培养基的 15 ml 离心管中。以 200 3 g 的速度离心 5 分钟。20. 小心吸出上清液。将沉淀物悬浮在 hiPSC 培养基(例如 1 ml)中,并接种到准备好的 Matrigel 包被的培养板上。前 24 小时加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M)。21. 如果 24 小时后细胞附着良好,则用 hiPSC 培养基更换培养基。如果附着力较低,再加入 1 ml/ml 2 mM Thiazovivin(最终浓度 2 m M),培养 24 小时。从第二天开始,每天更换培养基,每孔(6 孔)加入 2 ml hiPSC 培养基。继续“hiPSC 传代和维护”,步骤 1-8。
• 96-well PCR sample plates ( Refer to Appendix in Fragment Analyzer User Manual ) • Multichannel pipettor and/or liquid handling device capable of dispensing 1-100 µL (sample plates) and 1,000 µL (inlet buffer plate) • Pipette tips • 96-well plate centrifuge • Adhesive PCR plate seals • Sub-micron filtered DI water system: for dilutions • 96-deepwell 1 ML板:入口缓冲液和/或废物板(Agilent#p60-20或Fisher Scientific#12-566-120)•试剂储层50 ml:用于移液入口缓冲板(VWR#89094-680,或类似),或类似)•圆锥形的中心管•圆锥形的分离型分离凝胶+die+die+die+die+die capilure/或1x
在PCR之前用PCR级水重复DNA或稀释DNA(使用至少2 ng/µl的浓度)。如果Gen X Tract™树脂或磁性颗粒存在于DNA模板中,则在12,000 rpm处离心5分钟,然后将上清液用于PCR。
7。加入8毫升冰冷的PM3缓冲液,并通过将管反转10到15次中和裂解物,立即混合。(不要涡旋!)- 注:•确保培养细胞的密度最佳,缓冲液体积(PM1,PM2,PM3)应与培养体积成比例地增加。(ex。培养体积,60〜120 ml:PM1,8 ml; PM2,8毫升; PM3,8 ml培养体积,120〜240 ml:PM1,16 ml; PM2,16毫升; PM3,16毫升)•处理120〜240 ml细菌时,需要额外的PM1,PM2和PM3的缓冲液体积时,可以单独购买缓冲液。•确保将细胞颗粒完全悬浮在缓冲液PM1中。•添加缓冲液PM2和缓冲液PM3后,完全混合样品混合物。通过离心8。在4°C下以≥5,000xg的距离离心20分钟。(最好在4°C下以15,000〜20,000 xg离心15分钟)。- 如果上清液仍包含悬浮物,则将上清液转移到干净的离心管上,然后重复此离心步骤。质粒的结合9。将上清液从步骤8传递到平衡的PM MIDI列。让其通过重力流动到PM MIDI柱并丢弃滤液。WASH PM MIDI第10列。通过施加12.5 mL PW缓冲液洗涤PM MIDI柱。允许PW缓冲液通过重力流量流经PM MIDI柱并丢弃滤液。
• Materials, Power, CNC for fully autonomous • Testing of Human/Robotic-Assisted Operations • Artificial Intelligence & Data Science • Sensors and Embedded Systems (for Precision Navigation and Timing) • Synthetic Environments • Planetary Analog Studies Laboratories and Testing Facilities • Advanced Multi-scale Infrastructure Materials Characterization • Small-to-Large Scale Seismic/Vibrational Testing • Mission Control Room for Teleoperations Testing • Hypervelocity Chamber for Meteoritic Impact Testing • Center for Radiation Engineering and Science for Space Exploration • Aerospace Human Systems Laboratory (AHSL) (PoC bjdunbar@tamu.edu) • Human-Rated Short-Radius Centrifuge (Acquired from JSC) PoC bjdunbar@tamu.edu • AeroSpace Technology Research and Operations (ASTRO) Lab • Land, Air and Space Research Lab (LASR)•Aggie卫星实验室(建造适用太空的工具)•创新证明地面综合体(陆军未来的命令2021年)
6如果菌株产生会干扰相分离的表面活性剂,请加入0.1体积3 M乙酸钠和1体积冷的异丙醇,混合并在冰上孵育20分钟。在5000 rpm处离心10分钟,并倒在上清液中。然后重悬于400μl的10和550μl十*中,然后转移到微分管中。
预防中心 (CDC) 微生物病实验室 (MDL) 和病毒与立克次体病实验室 (VRDL) 以及其他实验室。10. 准备细菌学研究标本的原始种植。11. 离心标本以准备血清学/病毒学测试。12. 准备细菌生物的质量控制。13. 协助微生物学家对患者标本进行鉴定。