从果蝇中的基因组DNA制备该方案可以从40-100 mg的成年蝇(蝇重约1 mg)中分离出高度纯的基因组DNA。首先,在核保持完整的条件下,蝇是在缓冲液中磨碎的,然后使用SDS将DNA从断裂的组织中释放出来。接下来,进行常规的苯酚提取(去除蛋白质)和氯仿提取(去除苯酚),并用乙醇沉淀核酸。离心后(去除脂质和小细胞分子),将核酸沉淀溶解并用rnasea(降解RNA)和蛋白酶K(降解rNASEA和其他蛋白质)串行消化。其他苯酚/氯仿沉淀和乙醇沉淀产生高度纯化的基因组DNA。我们的目标是完整的基因组DNA - 避免通过过度的移液和涡旋剪切DNA。1。将50个成年果蝇放入装有微型植物的1.5 mL微管中,并在500 µl的缓冲液中彻底磨碎A。用500 µl的缓冲液B冲洗杵,将冲洗液加入匀浆中;通过反转微管轻轻混合。在37°C下孵育1小时2。切断P1000微量移动尖端的尖端,然后使用它将匀浆(500 µL)的一半转移到第二个微管中。苯酚通过在每个管,帽和混合物中添加相等的体积(500 µL)Te饱和苯酚来提取样品。离心5分钟。3。使用截止P200尖端将透明顶层(水相)绘制为两个新的微管(每个微管)。避免绘制接口材料。离心5分钟。4。5。通过在每个管,帽和混合物中添加等体积(500 µl)苯酚的苯酚来重新提取样品。使用截止P200尖端将透明顶层(水相)绘制为两个新的微管(每个微管)。避免绘制接口材料。氯仿通过在每个管,帽和混合物中添加等体积(500 µl)的氯仿提取样品。离心1分钟。使用截止尖端将透明顶层(水相)绘制为两个新的微管(每个微管)。将NaCl添加到0.1m的最终浓度。乙醇通过在每个微管中添加2卷(〜850 µl)的EtOH来沉淀您的样品;轻轻混合。观察核酸的沉淀。将微管放在-20°C过夜以鼓励沉淀。6。离心10分钟。丢弃上清液;短暂地干燥SpeedVac中的颗粒(将显示使用)。7。如下,将样品组合到单个微管中。然后,使用截止P200尖端将500 µl TE缓冲液加到一个管中
2.1 药物管理 ................................................................................................ 2-1 2.2 酒精和自行服用的药物 ................................................................................ 2-1 2.3 免疫程序 ........................................................................................................ 2-1 2.4 献血 ................................................................................................................ 2-1 2.5 低压舱暴露 ...................................................................................................... 2-2 2.6 离心机暴露 ...................................................................................................... 2-2 2.7 模拟器训练 ...................................................................................................... 2-2 2.8 潜水、高压暴露 ................................................................................................ 2-2 2.9 剧烈体力活动 ................................................................................................ 2-3 2.10 接触化学武器药剂模拟物................................................ 2-3 2.11 眼科检查................................................................................ 2-3
cell3 Xtract具有非常简单且灵活的工作Flo,它允许在90分钟内使用大约45分钟的动手操作,在90分钟内处理1-10 mL的生物样品。柔性输入体积允许增加CFDNA的恢复和浓度,同时避免了多个1 mL提取的必要性。不需要专业设备,例如磁铁或真空歧管,只有一个微量离心机,一个能够容纳50毫升管的摆动桶离心机以及热块或水浴(55°C)。
1。根据表4获取裂解样品。2。彻底混合裂解溶液。3。在每个1.5 mL微输出管或包含样品的板的孔中添加一卷裂解溶液。基于样本类型和样品数量的体积,请参见表4。4。移液管上下以混合裂解溶液和每个管子中的样品。5。盖管或用粘合剂盖密封板,然后短暂离心管或板。
1。简短离心管,包含siRNA,以确保在管子的底部收集siRNA颗粒。2。使用表1。a中列出的所需量的所需的最终浓度重悬于无RNase 1X siRNA缓冲液中(请参见下面的注释)。例如:对于10 nmol的siRNA和20 µm库存浓度,加入500 µl 1x siRNA缓冲液。3。移液器上下溶液上下3-5次,避免引入气泡并牢固密封管(或多孔板)。4。在室温下将溶液放在轨道搅拌机/振动器上30分钟。5。简短离心管,包含siRNA,以确保将溶液收集在管子底部。6。使用260 nm处的紫外分光光度法验证siRNA的浓度。对于siRNA,1 µm = 13.3 ng/µl。对于microRNA模拟,1 µm = 14.1 ng/µl和microRNA发夹抑制剂,1 µm = 18.5 ng/µl请参阅FAQ,有关其他信息。7。RNA可以立即使用,或将等分等分为较小的体积以限制冻融周期的数量。重悬于的siRNA应将其存储在-20°C中,以手动除霜或非周期冰柜。在4°C下存储最多可容纳6周。
(3)条目59(有关Marou Sanat(又称Mohandesi Tarh Va Toseh Maro Sanat Company),95(有关Samen Industries(又称A. ) Khorasan冶金工业),98(有关Surena(又称A. ) sakhd va rah-an-da-zi)和179(关于Farayand Technique(又称 伊朗公司离心机技术的技术))在'I. I.的名单中 参与核或弹道导弹活动的人员和实体以及为伊朗政府提供支持的人员和实体。 ',在子标题下。 实体被删除,Mohandesi Tarh Va Toseh Maro Sanat Company),95(有关Samen Industries(又称A.Khorasan冶金工业),98(有关Surena(又称A. ) sakhd va rah-an-da-zi)和179(关于Farayand Technique(又称 伊朗公司离心机技术的技术))在'I. I.的名单中 参与核或弹道导弹活动的人员和实体以及为伊朗政府提供支持的人员和实体。 ',在子标题下。 实体被删除,Khorasan冶金工业),98(有关Surena(又称A.sakhd va rah-an-da-zi)和179(关于Farayand Technique(又称伊朗公司离心机技术的技术))在'I. I.的名单中参与核或弹道导弹活动的人员和实体以及为伊朗政府提供支持的人员和实体。',在子标题下。实体被删除,
在本应用注释中,我们展示了离心机CR22N如何进一步用于净化质粒DNA和PCR产物,这是体外转录的mRNA生产工作流程的第一步(图1)。为此,我们收集了一种含有质粒DNA的大细菌培养物,该培养物在Innova®S44I振动筛中生长。转子R9A2用于颗粒3 L细菌培养。使用转子R15A和转子R22A4的组合进行了一个1.5 L瓶中整个细胞膜的DNA纯化。最后,我们表明高质量的转录过程可以通过体外转录产生mRNA。
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。然后,使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞,T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。然后,使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞,T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。