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共享研究设施 | 施密特医学院
项目 位置 Olympus 荧光显微镜 201B Biorad Biologic 紫外可见光检测器/馏分收集器 301D Biotek elx 800 微孔板读数仪 301D Thermo Sorvall legend X1R 冷冻离心机 301E Perkin elmer microbeta 2450 微孔板计数器 301D Thermos evolution 220 紫外可见光分光光度计 301D Sonics vibracell 301E 精密微处理器控制 280 水浴 (2) 301 & 301E ThermoSci Max Q6000 培养箱/振荡器 (2) 301 Isotemp 228 水浴 301 ThermoSci Heratherm 烤箱 301 Zeiss invertoskop 40c 显微镜 301 Beckman coulter optima L80k 超速离心机 301 Panasonic 高压灭菌器201、217、301、317 Eppendorf 5417R 离心机 301 Beckman 库尔特 Avanti J25 高速离心机（2） 301 & 217 Barnstead 实验室系列 MaxQ7000 水浴（2） 201 & 301 Beckman OptimaMax 台式超速离心机 301 组织培养生物安全柜 201C&D、301& 301H、317G Heracell 150 培养箱 201C&D、301& 301H、317G 缺氧室 CoyLab（Prentice 博士负责） 201D GE Nanovue 分光光度计 201G 3D 打印机 201H Eppendorf 真空泵 & Heto 冷阱 201 Beckman 库尔特 allegra离心机 317 Inotech 细胞采集器 301D New brunswick C76 水浴振荡器 217 New Brunswick Series 25 落地式振荡器（陆博士负责） 317 Thermo Stericycle 培养箱（2 台） 317G Beckman coulter optima L90k 超速离心机 217 Olympus BX41 显微镜 217F Eppendorf Centra CL5 离心机 217 Eppendorf mastercycler 热循环仪 217 Ultrospec 500 pro 分光光度计 217E BMG Labtech Polarstar omega 217D BioRad gene pulser x cell 317E Spectramax m5 217F Thermo Legend 21R Microfuge 301E Sorvall ST16 离心机 301H
使用Qiagen dneasy和Qiashredder从过滤器中提取DNA
4。离心1分钟@≥8000x g。这是“洗手＃1”。5。将列转移到新的1.5 ml管，标有相同名称和“洗手＃2”。6。将50 µL缓冲液直接添加到柱膜上，然后在新管中离心1分钟 @≥8000x g。这是洗脱＃2。7。将样品（洗脱＃1和洗脱＃2存储在4°C下。如果几个月不使用DNA，请为冰箱制作等分试样并保留
使用蛋白质沉淀的DNA提取高产DNA
2 nd part (protein precipitation), done on: ___/___/___ Add 100 µl Protein Precipitation Solution to the cell lysate mixture.涡流有力。离心机为10分钟13000 rpm。如果颗粒不紧绷，请重复。将1000 µl 100％ETOH添加到新的1.5 ml管中。将上清液（=>包含您的DNA）倒入该管中。通过轻轻反转50次混合。离心机在13000 rpm处离心10分钟。小心地倒出上清液，请确保保持颗粒（这是您的DNA）。加入1000 µL 70％EtOH，然后将管子倒几次以洗涤颗粒。离心13000 rpm持续10分钟。小心地倒出上清液，请确保保持颗粒（这是您的DNA）。空调10分钟，使所有EtoH蒸发。一些液体可能会停留，但希望这是30％的水。不要过分，因为颗粒将很难洗脱。加入30 µL的1x TE或DDH20。在室温下孵育过夜过夜，以使所有DNA洗脱。存储。
rotocol 7642
g-force或相对离心力（RCF）是要应用于样品的重力量，并考虑了转子的每分钟旋转（RPM）和半径。最好使用RCF而不是RPM，因为转子尺寸可能有所不同，RCF会有所不同，而每分钟的转速保持不变。大多数现代离心机具有测量两者的功能。要将RCF转换为只有RPM设置的离心机，您可以检查离心机的供应商是否在其网站上具有转换工具。另外，您可以测量转子的最大半径并将信息输入公式：
酵母 DNA 制备 - 解决方案套件
• 将上清液倒入含有 300 µl 异丙醇 >99% 的干净 1.5 ml 微管中 • 轻轻颠倒 50 次以混合样品 • 以 15,000 g 离心 1 分钟（DNA 应可见为小白色沉淀） • 弃去上清液并将管短暂排干在干净的吸水纸上。添加 500 µl 洗涤缓冲液并颠倒管数次以洗涤 DNA 沉淀 • 以 15,000 g 离心 1 分钟。小心弃去乙醇。 • 在室温下风干 10-15 分钟
专业知识包由
•极性计WXG-4•分析平衡ABS 220-4N（最大220G，d = 0.1 mg）•超声清洁剂VMR VMR•密度和声速仪DSA5000M•数字折光计Kruss DR6200-TF（D = 0.00001）•D = 0.00001•Abbe Ratcractoter（d = 0.0002） 0.0002) • MITTAL SE-02 2MHz Ultrasonic Interferometer • Calibrated Cannon-Fenske Viscometers (#25 to #600) • Reference Liquids for Viscosity and Density (for Calibration Purposes) • Vacuum Pump • Exsiccator for Sample Storage • Fractional Distillation Equipment • Reflux Condenser • Magnetic Stirrer • Centrifuge
forprepreptm血液基因组DNA提取小型盒。 ...
在开始以下步骤之前，请阅读重要的笔记。1。将多达200 µL样品（全血，血清，血浆，体液，Buffy Coat）转移到微分离管（未提供）。- 如果样品体积小于200 µL，请添加适当的PBS体积。2。（可选）：如果需要无RNA的基因组DNA，则将4 µL的100 mg/ml RNase A加入样品中，并在室温下孵育2分钟。3。将20 µL蛋白酶K和200 µL Fabg缓冲液加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合。- 请勿将蛋白酶K直接添加到Fabg缓冲液中。4。在60ºC下孵育15分钟以裂解样品。在孵育过程中，每3〜5分钟间隔涡流一次。5。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。6。将200 µL乙醇（96〜100％）加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合10秒。7。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。8。将Fabg Mini柱放在收集管上。小心地将混合物（包括任何沉淀物）转移到Fabg Mini柱中。在6,000 x g处离心1分钟，然后将fabg mini柱放在新的收集管上。9。将400 µL W1缓冲液添加到Fabg Mini柱中，并以全速离心30秒，然后丢弃流通液。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到W1缓冲液中。10。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到洗涤缓冲液中。11。12。将750 µL洗涤缓冲液添加到Fabg Mini柱中，并全速离心30秒，然后丢弃流通液。全速离心3分钟以干燥色谱柱。重要步骤！此步骤将避免残留液体抑制随后的酶促反应。将Fabg Mini柱放在洗脱管上。13。将加热洗脱缓冲液或DDH 2 O（pH 7.5-9.0）加入Fabg Mini柱的膜中心。站立fabg mini柱持续3分钟。- 重要步骤！为了有效洗脱，请确保将洗脱溶液分配到膜中心并完全吸收。14。全速离心1分钟以洗脱总DNA。15。将总DNA存储在4°C或-20°C。
加尔各答生物科技园 2022 运营指南和手册
1. DNA 测序仪和分析仪（3500 基因分析仪）- Applied Bio systems，型号：622-0010 2. 实时聚合酶链式反应机 - Applied Bio systems，型号：Step 1+ 实时 PCR 系统 3. 固体 4 分析仪 - Applied Bio-systems 4. 梯度热循环仪 (PCR) - Bio-Rad，型号：C 1000 5. ELISA 板读数仪（i MARK 微孔板读数仪）- Bio-Rad 6. 凝胶文档系统 - Bio-Rad 7. 快速蛋白质液相色谱纯化 (FPLC) 系统 Akta 纯化器 - GE BOX 900 8. UV-VIS 分光光度计 – Shimadzu，型号：UV-2450 9. 三目倒置显微镜 – Nikon，型号：ELWD0.3/OD 75 10. 台式冷冻离心机 - Thermo Scientific 11. 落地式冷冻离心机 - Beckman coulter 12. 二氧化碳培养箱 - New Brunswick 13. 垂直 -85˚C 深度冷冻机 - New Brunswick 14. 离心机 - Eppendorf，型号：5810 R 15. 寡核苷酸合成仪 Polyplex - Dig lab，型号：PPX019 16. BOD 培养箱 - IKON Instruments 17. 冷冻机（垂直 -20°C）- Vestfrost 18. 冷冻机（垂直 4°C） 19. 卧式冷冻机（2 个） 20. 冷冻机（垂直） 21. 水浴
样品离心的技术评估注意：1。
I.不要将样品带入离心管中。将散装样品带入烧杯，烧瓶等。II。 技术官员将在加载离心机之前评估散装样品的等分试样（约10毫升）。II。技术官员将在加载离心机之前评估散装样品的等分试样（约10毫升）。
天木细菌DNA试剂盒
50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。 在室温下孵育2-5分钟，然后在12,000 rpm（〜13,400×g）下离心2分钟。 注意：如果洗脱缓冲液的体积小于50μL，则可能会影响恢复效率。 洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。 我们建议选择缓冲液或蒸馏水（pH 7.0-8.5）以洗脱gDNA。 对于长期存储DNA，建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储，因为存储在水中的DNA会接受酸水解。 为了提高gDNA产量，可以将洗脱液重新加载至CB3，在室温2分钟下孵育，然后以12,000 rpm（〜13,400×g）的速度离心2分钟，以获得最终的洗脱。50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。在室温下孵育2-5分钟，然后在12,000 rpm（〜13,400×g）下离心2分钟。注意：如果洗脱缓冲液的体积小于50μL，则可能会影响恢复效率。洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。我们建议选择缓冲液或蒸馏水（pH 7.0-8.5）以洗脱gDNA。对于长期存储DNA，建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储，因为存储在水中的DNA会接受酸水解。为了提高gDNA产量，可以将洗脱液重新加载至CB3，在室温2分钟下孵育，然后以12,000 rpm（〜13,400×g）的速度离心2分钟，以获得最终的洗脱。