在开始以下步骤之前,请阅读重要的笔记。1。将多达200 µL样品(全血,血清,血浆,体液,Buffy Coat)转移到微分离管(未提供)。- 如果样品体积小于200 µL,请添加适当的PBS体积。2。(可选):如果需要无RNA的基因组DNA,则将4 µL的100 mg/ml RNase A加入样品中,并在室温下孵育2分钟。3。将20 µL蛋白酶K和200 µL Fabg缓冲液加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合。- 请勿将蛋白酶K直接添加到Fabg缓冲液中。4。在60ºC下孵育15分钟以裂解样品。在孵育过程中,每3〜5分钟间隔涡流一次。5。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。6。将200 µL乙醇(96〜100%)加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合10秒。7。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。8。将Fabg Mini柱放在收集管上。小心地将混合物(包括任何沉淀物)转移到Fabg Mini柱中。在6,000 x g处离心1分钟,然后将fabg mini柱放在新的收集管上。9。将400 µL W1缓冲液添加到Fabg Mini柱中,并以全速离心30秒,然后丢弃流通液。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到W1缓冲液中。10。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到洗涤缓冲液中。11。12。将750 µL洗涤缓冲液添加到Fabg Mini柱中,并全速离心30秒,然后丢弃流通液。全速离心3分钟以干燥色谱柱。重要步骤!此步骤将避免残留液体抑制随后的酶促反应。将Fabg Mini柱放在洗脱管上。13。将加热洗脱缓冲液或DDH 2 O(pH 7.5-9.0)加入Fabg Mini柱的膜中心。站立fabg mini柱持续3分钟。- 重要步骤!为了有效洗脱,请确保将洗脱溶液分配到膜中心并完全吸收。14。全速离心1分钟以洗脱总DNA。15。将总DNA存储在4°C或-20°C。
主要关键词