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World File Search SystemCloning
克隆载体
1. 质粒 质粒是自然产生的染色体外 DNA 片段，可以稳定地从一代传到另一代。质粒携带编码抗生素、某些毒素或重金属抗性的基因，或产生 DNA 限制和修饰酶的基因。质粒的拷贝数可以从 1-2 到多个拷贝 (10-200)/细胞不等。质粒用于克隆不超过 10 Kb 的小片段 DNA，该片段位于称为多接头的位点，多接头是一小段 DNA，其中包含许多限制位点，质粒可以用任何限制酶切割这些位点，然后将所需的 DNA 连接到该位点。 pBR322 质粒 pBR322 是 1977 年创建的第一个大肠杆菌中常用的载体。它是一个小质粒（4361 bp），每细胞含有 15-20 个拷贝数，pBR322 还含有复制起点，并带有对氨苄青霉素和四环素的两个抗生素抗性基因。该质粒具有超过 40 种限制性酶的独特限制位点。
GO-CRISP 克隆协议
使用下面的引物模板（表 1），片段 2 可以通过 PCR 扩增（图 4A）。我们建议使用 gRNA NIA TLS1/2 作为 PCR 模板。“NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN”（表 1）代表应由 gRNA 靶序列替换的核苷酸。用于创建 NIA1 靶向片段 2 的引物列于下方作为示例（表 1）——这些引物用于创建 gRNA NIA TLS1/2。引物还在片段末端添加了 BsaI 切割位点（图 4A），这些位点与 gRNA 片段 1 TLS1/2 中的双 BsaI 位点兼容。
分子克隆的历史
1。Bertani，G。和Weigle，J.J。 （1953）J。细菌。 65，113–121。 2。 Luria，S.E。 和人类，M.L。 （1952）J。细菌。 64，557–569。 3。 Clouds，G.，Shichi，M.L。 和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Bertani，G。和Weigle，J.J。 （1953）J。细菌。65，113–121。2。Luria，S.E。 和人类，M.L。 （1952）J。细菌。 64，557–569。 3。 Clouds，G.，Shichi，M.L。 和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Luria，S.E。和人类，M.L。（1952）J。细菌。64，557–569。3。Clouds，G.，Shichi，M.L。 和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Clouds，G.，Shichi，M.L。和Weigle，J.J。 （1961）natl。学院。SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。美国，47，869–878。4。Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961）natl。学院。SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。美国47，857–868。5。课程，N.R。等。al。（1967）生物化学。生物。res。公社。28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。28，578–586 6。公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。（1967）Proc。natl。学院。SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。美国58，240-247。7。代表，M。（1967）Proc。natl。学院。SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 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分子克隆的历史
1。Bertani，G。和Weigle，J.J。 （1953）J。细菌。 65，113–121。 2。 Luria，S.E。 和人类，M.L。 （1952）J。细菌。 64，557–569。 3。 Clouds，G.，Shichi，M.L。 和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Bertani，G。和Weigle，J.J。 （1953）J。细菌。65，113–121。2。Luria，S.E。 和人类，M.L。 （1952）J。细菌。 64，557–569。 3。 Clouds，G.，Shichi，M.L。 和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 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（1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。Clouds，G.，Shichi，M.L。和Weigle，J.J。 （1961）natl。学院。SCI。 美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国，47，869–878。 4。 Meselson，M。和Weigle，J.J。 （1961） natl。 学院。 SCI。 美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 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Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国47，857–868。 5。 课程，N.R。等。 al。 （1967）生物化学。 生物。 res。 公社。 28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。美国47，857–868。5。课程，N.R。等。al。（1967）生物化学。生物。res。公社。28，578–586 6。 公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。28，578–586 6。公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。公司，M.L.，Becker，A。和Hurwitz，J。（1967）Proc。natl。学院。SCI。 美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国58，240-247。 7。 代表，M。（1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。美国58，240-247。7。代表，M。（1967）Proc。natl。学院。SCI。 美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国59，1300–1306。 11。 史密斯，H.O。 和Wilcox，K.W。 （1970）J。Mol。 大。 51，379–391。 12。 Danna，K。和Nathans，D。（1971）Proc。SCI。美国57，148–155。 8。 Olive，B.M。 和Lehman，I.R。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1426–1433。 9。 Weiss，B。和Richardson，C.C。 （1967）Proc。 natl。 学院。 SCI。 美国57，1021–1028。 10。 Line，S。和Arbre，W。（1968）Proc。 natl。 学院。 SCI。 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Mandel，M。和Higa，A。 （1970）J。Mol。 生物。 1970，53，159–162。SCI。美国68，2913–2917。 13。 Mandel，M。和Higa，A。 （1970）J。Mol。 生物。 1970，53，159–162。美国68，2913–2917。13。Mandel，M。和Higa，A。（1970）J。Mol。 生物。 1970，53，159–162。（1970）J。Mol。生物。1970，53，159–162。
nzy-a pcr克隆套件
nzy-A快速的PCR克隆试剂盒设计用于对含有3´-A悬垂的PCR产物进行快速有效的克隆，这是由于使用非卫生读取DNA聚合酶具有末端转移酶活性的扩增，例如TAQ DNA聚合酶。这种方法结合了改进的连接缓冲液的效率与快速连接酶的速度，以在室温（20-25°C）的仅10分钟内在10分钟内进行快速连接。通过将NZYTECH的PNZY28与ECORV切割NZY-A快速克隆试剂盒提供的克隆载体，并在两端添加3´-末端胸苷。这些单一的3´-T突出者不仅通过为包含PCR产品的3'-A提供兼容的悬垂性，还可以通过防止向量的重新循环。在PNZY28矢量的多个克隆区域中引入了多个限制位点。使用ECORI或BAMHI的矢量消化允许释放PCR产物，因为矢量克隆区域侧翼是两种酶的识别位点。