嵌合抗原受体 (CAR) 重定向 T 细胞是治疗血液系统恶性肿瘤的有效选择。目前,CAR T 细胞的主要制造方法依赖于逆转录病毒转导。随着基因编辑的出现,使用腺相关病毒进行基因转移将 CD19-CAR 插入 T 细胞受体 (TCR) α恒定区 (TRAC) 基因座已得到证实,并且这些 CD19-CAR T 细胞比逆转录病毒转导的细胞表现出更好的功能性。然而,临床级病毒生产很复杂,而且成本高昂。在这里,我们优化了一种无病毒基因组编辑方法,使用 CRISPR-Cas 和双链模板 DNA (dsDNA) 通过核酸酶辅助同源性定向修复 (HDR) 将 CAR 有效地插入原代人类 T 细胞的 TRAC 基因座。我们评估了 DNA 传感器抑制和 HDR 增强作为两种药物干预措施,分别以提高细胞活力和相对 CAR 敲入率。虽然转染的 dsDNA 的毒性无法完全预防,但两种干预措施的结合显著提高了 CAR 敲入率和 CAR T 细胞产量。由此产生的 TRAC 替代 CD19-CAR T 细胞在体外表现出抗原特异性细胞毒性和细胞因子产生,并在异种移植小鼠模型中减缓了白血病进展。扩增子
纳米杆技术使用生物发光共振能量转移(BRET)研究活细胞中蛋白质蛋白质的相互作用。研究了成人骨形成的调节剂Schnurri-3的相互作用,与ERK-2使用了2个不同的载体。一个载体包含Schnurri-3和Nanoluc®,一种具有高效率生成光子的发光酶,第二个载体包含ERK-2 PlusHalotag®,荧光配体。当两种蛋白质接近近距离时,观察到荧光。确定了Schnurri-3-ERK相互作用抑制剂的纳米伯特分析以及纳米信号与荧光信号的比率。使用MEK在竞争相互作用的单元格中验证了这一点,如果过表达,则会降低荧光信号。
通过同源定向修复 (HDR) 定义的 CRISPR-Cas9 基因组编辑对于将点突变和 DNA 供体构建体引入细胞系、动物以及治疗人类遗传疾病非常重要。然而,HDR 修复 DNA 双链断裂 (DSB) 的效率通常远低于非同源末端连接 (NHEJ) 进行的不必要的竞争性修复。因此,找到简单的程序来扭转 CRISPR-Cas9 基因组编辑过程中的 DSB 修复途径选择朝向 HDR 而不降低总基因组编辑效率是非常有意义的 [1] 。基因组编辑效率受 sgRNA/Cas9 的切割效率、参与 DNA 修复的蛋白质的表达以及它们对 DSB 的募集的影响。染色质修饰被认为可以调节所有这些过程。在半定量测定中,未发现 5-氮杂胞苷 (5-aza) 抑制 DNA 甲基化会改变基因组编辑效率 [2] 。组蛋白 3 赖氨酸 36 三甲基化 (H3K36me3) 促进 HDR,而 H3K36me2 以上下文依赖的方式增加 NHEJ [ 3 , 4 ]。据报道,异染色质中的致密 DNA 堆积(以 H3K27me3 和 H3K9me3 为特征)会影响低浓度 CRISPR-Cas9 下的修复速度,但不会影响 HDR/NHEJ 途径选择 [5] 。
a Institute of Experimental Pharmacology and Toxicology, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany b DZHK (German Centre for Cardiovascular Research), partner site Hamburg/Kiel/Lübeck, Hamburg, Germany c DiNAQOR AG, Pf ¨ affikon, Switzerland d Department of General and Interventional Cardiology, University Heart Center, Hamburg,德国E实验和临床研究中心在Helmholtz协会中的Max-Delbrück-Center分子医学中心与慈善活动和慈善活动“埃及大学” Humboldt-Universit - 柏林Zu和柏林卫生研究院,儿科心脏病学系,慈善 - 柏林大学医学,柏林,柏林,德国
在这项研究中,Kravčenko及其同事提高了我们对突触囊泡(SVS)(SVS)的理解,这对于神经递质的存储和释放至关重要。采用冷冻电子断层扫描,该研究表征了SV蛋白的多样性,其中包括SV表面上的小蛋白,内部的细长蛋白,以及随机分布在SVS表面的大V -ATP酶。v - ATPase结构显示出另一种跨膜相互作用伴侣突触素。这项研究在网格蛋白涂层的网状蛋白笼中发现了v- ATPases,并在囊泡上部分组装了网状蛋白涂层,并在神经元内和神经元内部,提供了对其结构对称性的见解。此外,该研究确定了细胞膜附近没有囊泡的网状蛋白篮。这些发现突出了SV的复杂分子结构,提供了广泛的透视图并补充了传统的蛋白质组学分析和荧光显微镜。
1。生物修复。2。微生物在一个健康概念中的作用。3。人类福利中的基因工程。4。微生物的工业用途。5。农业和环境中的可持续发展。6。食品安全和卫生中的微生物。
1。生物修复。2。微生物在一个健康概念中的作用。3。人类福利中的基因工程。4。微生物的工业用途。5。农业和环境中的可持续发展。6。食品安全和卫生中的微生物。
•学生将了解人类的基本解剖学和生理学,包括身体计划,器官位置及其功能。•学生将能够定义关键的流行病学术语,例如零星,流行,流行病和大流行,并将其与现实世界中的健康问题联系起来。•学生将能够描述细菌,病毒和真菌疾病,例如肺炎,流感,艾滋病和真菌病,并了解其预防和控制。•在本课程结束时,学生将能够解释蠕虫感染,以及由蚊子和壁虱传播的节肢动物传播疾病,包括矢量控制策略。•在本课程结束时,学生将能够确定特定传染病(例如SARS,结核病,霍乱)和非传染性疾病(例如癌症,糖尿病,糖尿病,肥胖,酒精中毒)的原因,症状,预防和控制。
在为LTSSMaryland的参与者完成第一个ADCAP时,MDC提供商护士将能够输入一个临时问题和护理计划,该计划不包含有关参与者健康状况的任何细节,并允许MDC提供者护士继续前往ADCAPS的下一部分。MDC提供商将需要在ADCAPS的“附件”部分中上传参与者护理计划的纸质副本,如果他们选择不输入参与者的完整问题和护理计划。输入临时问题和护理计划的说明如下。MDH将允许提供者遵循此过程,直到2019年11月30日。步骤1:完成并提交参与者的评估后,通过在问题部分的右角选择管理按钮开始为参与者添加问题。