基因和基因组编辑 - MDC 存储库
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通过同源定向修复 (HDR) 定义的 CRISPR-Cas9 基因组编辑对于将点突变和 DNA 供体构建体引入细胞系、动物以及治疗人类遗传疾病非常重要。然而,HDR 修复 DNA 双链断裂 (DSB) 的效率通常远低于非同源末端连接 (NHEJ) 进行的不必要的竞争性修复。因此,找到简单的程序来扭转 CRISPR-Cas9 基因组编辑过程中的 DSB 修复途径选择朝向 HDR 而不降低总基因组编辑效率是非常有意义的 [1] 。基因组编辑效率受 sgRNA/Cas9 的切割效率、参与 DNA 修复的蛋白质的表达以及它们对 DSB 的募集的影响。染色质修饰被认为可以调节所有这些过程。在半定量测定中,未发现 5-氮杂胞苷 (5-aza) 抑制 DNA 甲基化会改变基因组编辑效率 [2] 。组蛋白 3 赖氨酸 36 三甲基化 (H3K36me3) 促进 HDR,而 H3K36me2 以上下文依赖的方式增加 NHEJ [ 3 , 4 ]。据报道,异染色质中的致密 DNA 堆积(以 H3K27me3 和 H3K9me3 为特征)会影响低浓度 CRISPR-Cas9 下的修复速度,但不会影响 HDR/NHEJ 途径选择 [5] 。

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