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LightCycler® 多重 DNA 主控
2. 如何使用本产品................................................................................................................................................5 2.1. 开始之前....................................................................................................................................................................5 样品材料...................................................................................................................................................................................5 对照反应...................................................................................................................................................................................5 引物...................................................................................................................................................................................................5 探针...................................................................................................................................................................................................5 Mg 2+ 浓度....................................................................................................................................................................................5 一般注意事项...................................................................................................................................................................5 注意事项...................................................................................................................................................................................5 2.2.协议................................................................................................................................................................................................................ 6 LightCycler ® PRO、LightCycler ® 480 和 LightCycler ® 96 系统协议........................................................................ 6 LightCycler ® PRO 系统（多孔板 96 或 384）的使用协议......................................................................... 6 LightCycler ® 480 仪器 II（多孔板 96 或 384）的使用协议......................................................................... 7 LightCycler ® 96 仪器的使用协议.........................................................................................................................10 LightCycler ® PRO、LightCycler ® 480 和 LightCycler ® 96 仪器的 qPCR 反应设置.............................................................................................11 LightCycler ® 2.0 仪器的使用协议.........................................................................................................................12 LightCycler ® 2.0 仪器的 qPCR 反应设置仪器.................................................................................................15
神经生物学的多重面板 - ...
神经系统疾病包括影响中枢神经系统（CNS）和/或周围神经系统的高度复杂，多方面的疾病。它们是全球残疾和死亡率的主要原因之一，可能会损害大脑，脊髓，周围神经或神经肌肉功能（1-3）。此外，随着世界人口稳步衰老，与痴呆等衰老有关的健康状况已成为一个主要的公共卫生问题。神经退行性疾病（例如阿尔茨海默氏病）（AD）导致最普遍的与年龄相关的痴呆症，其特征是神经元死亡，认知能力下降和运动功能的丧失。神经退行性疾病中的神经元丧失归因于形成“偶然”斑块，缠结和刘易体的致病蛋白聚集体的形成和沉积，这可以自发或遗传突变引起。
高性能多路复用药物门控 CAR 电路
嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞可以彻底改变癌症医学。然而，过度激活、缺乏肿瘤特异性表面标志物和抗原逃逸阻碍了 CAR T 细胞的发展。需要一种由临床批准的药物调节的多抗原靶向 CAR 系统。在这里，我们介绍了 VIPER CAR（多功能蛋白酶可调节 CAR），这是一组用病毒蛋白酶结构域设计的可诱导 ON 和 OFF 开关 CAR 电路。我们使用 FDA 批准的抗病毒蛋白酶抑制剂在异种移植肿瘤和细胞因子释放综合征小鼠模型中建立了它们的可控性。此外，我们将 VIPER CAR 与其他药物门控系统进行了对比，并展示了一流的性能。我们使用 ON VIPER CAR 和 OFF 来那度胺-CAR 系统展示了它们的体内正交性。最后，我们通过结合各种 CAR 技术设计了几个 VIPER CAR 电路。我们的多路复用、药物门控 CAR 电路代表了 CAR 设计的下一个进展，能够通过先进的逻辑和调节来增强 CAR T 细胞疗法的安全性。
多重素数编辑和非病毒的传递...
当前的CAR转基因输送和表达策略受到以下限制：➢通过慢病毒或转座子通过慢性病毒或转座的半随机整合危险，即在核酸酶 + to ndrate +限制与DSB诱导相关的HDR限制的核酸酶 +模板的核酸酶积分的靶向整合（例如/chromothips）
多重基因编辑 - 伊纳里农业
Inari 是一家 SEEDesign™ 公司，利用新育种技术突破可能性的界限，设计出对自然有益的种子，以实现更可持续的粮食系统。人工智能预测设计和开创性的多重基因编辑工具箱相结合，使 Inari 能够充分发挥种子的潜力，并推进关键解决方案，这些解决方案具有广泛的应用，可以用更少的资源种植更多的粮食。这些产品将成倍地提高产量，同时减少对土地、水和氮使用的环境影响——在为整个价值链创造价值的同时，对自然产生积极影响，从农民开始。
Brightfield多重免疫组织化学分析PD- ...
摘要：靶向PD1/PD-L1免疫检查点路径 - 迅速成为黑色素瘤患者的治疗策略。的确，在某些情况下，在黑色素瘤样品中通过IMO组织化学（IHC）对PD-L1表达（IHC）的量化已经允许访问抗PD-1/PD-1/PD-L1免疫疗法。尽管对PD-L1测试的需求不断增加，但在评估和量化中的累积经验的增加并行，但公平地认识到，黑色素瘤样品中的PD-L1评估仍然带来了一些关键问题。该技术报告的目的是为Ventana台式中的PD-L1/SOX10开发和验证多重双染色方案以进行常规实践。我们的结果表明，双重标记提供了必要的工具，可以清楚地识别PD-L1 + Mela-Noma细胞。同时可视化2种不同的蛋白质靶标，可以在组织形态的背景下评估2个标记之间的地形关系。需要未来的研究来测试该技术在实施互助学家协议中的现实世界中的适用性和有效性。
多重标记与顺序基因编辑
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 （未经同行评审认证）提供，是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者，此版本于 2022 年 1 月 2 日发布。；https://doi.org/10.1101/2022.01.02.474730 doi：bioRxiv 预印本
2030 年社会公平战略 - 多元化
建筑业为全球 7% 的劳动力提供了就业机会，其产生积极影响的潜力巨大。社会不公平和不公正的原因深深植根于塑造我们社会的体系中，包括建筑环境。建筑的设计、建造和维护方式对公平和正义有着巨大的影响。整个行业都存在着弱点：从工资盗窃到不安全的工作场所和住宿条件；各级缺乏多样性；工作时间过长和心理健康压力。现状需要彻底改变——在 Multiplex，这种改变已经在进行中。我们的社会公平战略列出了从现在到 2030 年我们将采取的行动，以改善我们创造的工作和建筑环境。这将涉及推进我们的业务实践并影响我们的同行、客户和分包商，以确保我们的项目积极促进社会公平。
农杆菌介导的多重 CRISPR/...
摘要：在巴基斯坦，棉花作物占国内生产总值的 23%，其大量出口为贸易业务提供了 60% 的总利润。不幸的是，双子病毒以惊人的速度摧毁了棉花作物。现在，CLCuV 导致棉花作物发生棉花卷叶病毒病并降低其产量。这种病毒对棉花植物的攻击给巴基斯坦造成了 50 亿美元的损失。在这方面，使用了一些传统方法，如植物育种和特定的 RNA 编辑。同时，生物技术引入了一些非常有吸引力的技术，这些技术具有根除这种疾病的巨大潜力。这些技术包括 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9。在我的研究中，采用 CRISPR 方法是因为其具有出色的位点特异性诱变效率。不同 CLCuV 的 rep 基因的保守位置被确定为靶位点。这些特定位点为 3 个 gRNA 的建立提供了信息。克隆了具有多个引导RNA和1Cas9的单一表达载体pHSE-401。使用了特定的棉花品种coker-312。通过切除棉花植株的下胚轴并通过农杆菌EHA-105菌株进行传递感染来进行载体的转化。然后，将1000个感染性下胚轴转移到具有各自抗生素的MSB上，然后转移到将下胚轴边缘转化为愈伤组织的再生培养基上。仅获得两个转基因愈伤组织，转基因愈伤组织的百分比为0.02％，通过PCR筛选并在凝胶上进行电泳。200bp的条带证实了棉花愈伤组织中存在CRISPR/Cas9构建体。关键词：CRISPR/Cas9，多重载体，3gRNA和Cas9，农杆菌，转化，愈伤组织。版权所有 © 2020 作者：这是一篇开放获取的文章，根据知识共享署名 4.0 国际许可（CC BY-NC 4.0）分发，允许在任何媒体中无限制地使用、分发和复制，用于非商业用途，前提是注明原作者和出处。 1. 引言 巴基斯坦的经济主要依靠农业部门。其在 GDP 中的百分比为 19.82%，但农业部门的参与度从 1950 年的 50% 下降到 2014 年的 21% 左右。农产品、林业劳动力、牲畜养殖和农作物转化所赚取的收入养活了巴基斯坦 64% 的乡村人口。据统计，66% 的巴基斯坦人在农业部门就业。在 20 世纪的十年里，农产品的年增长率为 2.5%。在 1997 年的农业一揽子计划中，农作物产量增长了 5.9%。为了提高农业生产力，年产量从 2010 年的 0.2% 增加到 2015 年的 2.9%（匿名，2014-2015 年）。
利用链球菌进行体内多重基因靶向...
胰腺导管腺癌是一种致命的癌症类型，与体细胞中的多种基因突变有关。基因工程小鼠几乎不适用于开发胰腺癌模型，异种移植模型在反映早期胰腺癌方面存在局限性。因此，使用成簇的规律间隔的短回文重复序列进行体内体细胞基因工程用于生成胰腺癌动物模型越来越受到关注。在本研究中，我们选择了 Kras、Trp53、Ink4a、Smad4 和 Brca2 作为靶基因，并应用空肠弯曲菌 Cas9 (CjCas9) 和化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 通过腺相关病毒 (AAV) 转导来开发胰腺癌。在确认 AAV2 的多灶性和弥漫性转导后，我们生成了 SpCas9 过表达小鼠，该小鼠在两次 AAV 转导后表现出靶基因中高双链 DNA 断裂 (DSB) 和胰腺上皮内瘤变 (PanIN) 病变；然而，三次 AAV 转导的野生型 (WT) 小鼠没有出现 PanIN。此外，将小型 Cjcas9 应用于具有两个 AAV 系统的 WT 小鼠，该小鼠还出现了高广泛性 DSB 和 PanIN 病变。观察到了导管和胰岛细胞中的组织学变化和癌症标志物（如 Ki67、细胞角蛋白、Mucin5a、α 平滑肌肌动蛋白）的表达。此外，研究还揭示了几个发现，例如 1) AAV-CjCas9 的多重 DSB 潜力、2) 导管周围淋巴细胞浸润、3) 多灶性癌症标志物表达，以及 4) 在 AAV 介导的靶向中启动 PanIN 需要 12 个月以上。在这项研究中，我们提出了一种用于体内癌症建模的有用工具，该工具也适用于其他疾病模型。