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制表师DNA图书馆准备套件与...
图3。有效的转换可提供高库的产量，而不会放大。使用多种市售解决方案构建了无PCR WGS库：KAPA HyperPrep（超声控制），WatchMaker DNA库准备碎片，Kapa Exprus，Kapa Evoplus，Kapa Evoplus，Nebnext Ultra Ultra II FS DNA库Prep和Illumina DNA Prep。Na12878人类基因组DNA的300 ng（所有评估套件）或75 ng（仅钟表者）被用作输入。工作流程进行了优化，通过调整碎片和结合后清理参数来提供类似尺寸的最终库。（a）使用Novaseq 6000输出数据绘制插入大小分布。（b）最终无PCR库的产量，如qPCR所测量。制表剂解决方案提供适用于WGS的插入大小，而无需锯齿状图案，并且产量超过了其他准备，包括超声处理。
SITE-Seq：一种测量 Cas9 切割的全基因组方法
进行多个反应时，我们通常将它们组合起来，然后装入 15 μL 进行分析。**I. 末端修复和适配器 2 连接。**1. 从 -20°C 中取出 NEBNext Ultra 末端修复/ dA 尾部模块试剂，在冰上解冻。2. 按如下方式组装末端修复反应：碎片 DNA \（来自步骤 H）\（27.7µL）末端修复缓冲液 \（10x）\（3.3µL）末端修复酶混合物 \（1.5µL）水 \（0.5µL）总计 \（33µL）3. 将反应在 20°C 下孵育 30 分钟，然后在 65°C 下孵育 30 分钟。 4. 在末端修复过程中，按照下列步骤形成接头 2： 接头 2 N7 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N6 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N5 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 Rev \(100µM) \(3µL) 2x Annealing Buffer \(6µL) Total \(1µL) 5. 将接头 2 混合物在 95°C 下孵育 5 分钟，然后让反应
phi29 样 Microbacterium foliorum podovirus 噬菌体的完整基因组序列 PineapplePizza
使用氯化锌沉淀法（7）从高滴度裂解物中提取 DNA，使用 NEBNext Ultra II 试剂盒（New England Biolabs，马萨诸塞州伊普斯威奇）制备用于测序，并使用匹兹堡噬菌体研究所（宾夕法尼亚州匹兹堡）的 Illumina MiSeq 仪器（v3 试剂）进行测序。对总共 1,056,847 个单端 150 bp 读数进行 9,214 倍覆盖度的测序。分别使用 Newbler v2.9 和 Consed v29.0 进行组装和质量控制检查（8, 9）。PineapplePizza 的基因组有 16,662 个碱基对，G + C 含量为 53.6%。没有测序读数超出基因组末端，基因组末端的 101 bp 反向重复与共价结合的末端蛋白一致，如 phi29（10）。使用 NCBI BLASTn (11) 进行全基因组比对，结果显示与其他 Microbacterium 噬菌体无显著的核苷酸序列相似性，PineapplePizza 被归类为单一基因。使用 Glimmer v3.02 (12) 和 GeneMark v2.5 (13) 自动注释 PineapplePizza 的基因组，然后使用 Phamerator (14)、DNA Master v5.23.6 ( http://phagesdb.org/DNAMaster/ )、PECAAN、BLAST (11) 和 HHPred (15) 手动细化。Aragorn v1.2.38 (16) 或 tRNAscan-SE v2.0 (17) 未鉴定出 tRNA 基因。所有分析均使用默认设置进行。
RNase 4（NEB＃M1284）MRNA 5´CAP结构的DNA探针指导分析| neb nebnext UltraExpress FS DNA库准备套件E3340手册 化学品安全技术说明书 使用Nebridge®金门组件进行蛋白质工程的DNA洗牌 君主质粒小型套件T1010手册 新英格兰Biolabs分析证书 胜任的细胞 基因组编辑 Authenticase M0689手册 R＆D和对... 的制造支持 新英格兰Biolabs分析证书 Authenticase M0689手册 裂解靠近DNA片段的末端（线性化矢量） Nebnext Ultra DNA库Prep套件，用于Illumina E7370手册 腺病毒2 Nebnext Ultra II DNA库Prep套件，用于Illumina，用于Illumina（独特的双索引UMI适配器DNA）E7645 E7645 E7103手动 NEBNEXT微生物组DNA富集试剂盒E2612手册 DNA组装与合成生物学 DNA组装与合成生物学 通过双链DNA片段的单链DNA寡桥构建SGRNA-CAS9表达载体 nebnext®快速DNA库预备组件454 Monarch MAG病毒DNA/RNA提取套件T4010手册 新英格兰Biolabs分析证书 T4 DNA连接酶（M0202）CHN 的安全数据表 翠鸟柔性自动隔离病毒DNA/RNA的方案| neb 基因编辑 φx174
已测试至少20 nt。探针可以用3´或5´生物素/Desthiobiotin亲和力组设计，用于链霉亲和素富集（NEB＃S1421）。为了获得最佳结果，受保护的DNA：RNA杂交区应为4或5个核苷酸