在酶测定中测量了Schrodinger的MALT1抑制剂的效力。用于OCI-LY3和OCI-LY10细胞中的体外靶标参与测定法,通过使用MSD测定法(Messoscale discovery)测量了细胞裂解物中未溶解的BCL10的MALT1抑制剂24小时的浓度处理24小时。用于在OCI-LY3和OCI-LY10细胞中的细胞增殖测定法,用浓度的MALT1抑制剂处理96小时,然后用CellTiter-Glo分析(Promega)处理以测量细胞活力。
使用HSOP 461和HSOP 466(Spectratating GuideLine),使用T细胞的磁珠细胞分选 T细胞受体谱分型。 使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。 Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。T细胞受体谱分型。使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。
使用 TR-FRET 评估 ABBV-453 对重组人 MCL-1、BCL-2 和 BCL-X L 的亲和力,并确定与重组 BAK 复合的每种蛋白质的抑制常数 (Ki)。用含有 10% HS 的培养基中的 ABBV-453 处理人类肿瘤细胞系 H929、Molt-4 和 RS4;11 细胞 24 小时,并根据制造商的说明使用 CellTiter-Glo 确定对活力的影响 (Promega)。根据所得剂量反应曲线计算每个 EC 50 (半最大有效浓度)。数据以三到七次独立实验的平均值 ± 标准差表示。
ucd-pymt,产生显性阴性蛋白,该蛋白特异性抑制了由Charles Vinson(NCI,Bethesda,MD,MD,USA)提供的C/EBP成员的DNA结合。根据制造商的说明,使用JetPEI(Polytransfection; Qbiogene,Irvine,CA,美国)进行瞬态转染。允许转染进行16小时,并用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理细胞24小时,然后再诱导凋亡或用TCDD处理TCDD进行RNA表达分析。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。 16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。 使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。
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•Prodegy平台用于开发一系列少数(CRBN)介导的CDK4/6双功能降解器,包括开发候选BTX-9341。•通过cas9-grna复合物的核反射产生基因敲除细胞系。•通过用BTX-9341处理的细胞的蛋白质裂解物的免疫印迹分析了靶降解6小时或所示。•经过24小时的治疗后或通过指示的免疫印迹,通过细胞西部分析了磷酸化的RB。•在碘化丙啶染色后通过流式细胞仪治疗24小时后,进行了细胞周期分析。•通过10天菌落形成测定后,通过CellTiter-Glo 2.0分析(Promega)测量细胞增殖。•媒介物,CDK4/6抑制剂和BTX-9341在BALB/C裸鼠异种皮下或颅内模型中口服。
通过 DNA 修复调节和 pegRNA 工程改进基于核酸酶的引物编辑 Panagiotis Antoniou* 1 、Louis Dacquay* 1,2 、Niklas Selfjord 1 、Katja Madeyski-Bengtson 3 、Anna-Lena Loyd 3 、Euan Gordon 4 、George Thom 5 、Pei-Pei Hsieh 1 、Sandra Wimberger 1 、Saša Šviković 1 、Mike Firth 6 、Nina Akrap 1 、Marcello Maresca 1# 和 Martin Peterka 1# 1 基因组工程,Discovery Sciences,研发部,阿斯利康,瑞典哥德堡 2 Promega Corporation,美国威斯康星州麦迪逊 3 转化基因组学,Discovery Sciences,研发部,阿斯利康,瑞典哥德堡 4 发现生物学,Discovery Sciences,研发部,阿斯利康,瑞典哥德堡 5 英国剑桥阿斯利康公司发现科学研发部体内表达生物制剂 6 英国剑桥阿斯利康公司发现科学研发部数据科学与定量生物学 * 这些作者的贡献相同 # 通信地址:marcello.maresca@astrazeneca.com martin.peterka@astrazeneca.com
FDA 批准的 1,448 种药物化合物库购自 Selleck Chemicals。INC280 由 Novartis(瑞士巴塞尔)提供。将 HAP1、HAP1 RNF43 KO 和 HAP1 PWWP2B KO 细胞以 2,000 或 3,000 个细胞/孔的密度接种在 384 孔透明底培养板中,加入 20 µL 含有 10% FBS 的 IMDM 或 RPMI 1640 培养基,培养 24 小时。然后,将 10 µM FDA 批准的药物加入孔中,并将细胞再孵育 48 小时。对照细胞未暴露于药物。在增殖测定当天,除去培养基,向384孔板的每个孔中加入20μL新鲜培养基,然后加入5μL MTS溶液(Cell Titer 96 Aqueous One Solution细胞增殖测定试剂盒;美国威斯康星州麦迪逊市Promega公司),将板在37°C下孵育1小时。
请选择您想要为样本提供的服务。______Service 1- Reading DNA/Primer concentrations and making necessary dilutions ______Service 2- Performing Sequencing PCR reactions ______Service 3- Running the Sequencing reactions Sample Information, please circle or fill in the blank ______Service 4- Purification of Sequencing PCR reactions Method Purified: CHCI3/phenolCscl Gel Column (Qiagen, Promega, Other_______) None ______服务仅加载(3730)和发送数据准备方法:碱性裂解沸腾的ctab其他______服务6-确定在二十四小时内确定的数据浓度:分光光度计荧光计凝胶其他有关详细信息,请参见我们的网站。DNA最初来自_______________的生物体会寄回额外的模板吗?是否