蛋白质的特异性RNase源:带有猪RNase抑制剂基因的重组大肠杆菌菌株。单位定义:1个单位定义为抑制50%cytidine 2',3'-循环单磷酸的水解所需的酶量,由5 ng的RNase A(1)抑制。分子量:74,828 Daltons质量控制分析:使用2倍连续性稀释方法确定单位活动。在1x RNase抑制剂反应缓冲液中制成酶的稀释液,并添加到含有1mm胞苷2',3'-环磷酸1mm的1000 µL反应中,其中包含100mm tris-tris-tris-tris-trisate,1mm Edta,1mm Edta,pH 6.5的1X反应缓冲液中的1μgrNase A。在286nm处的吸光度。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度的物理纯度确定,通过浓缩和稀释的酶溶液的SDS-PAGE,然后是银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定,在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定,该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定,该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。
RiboShield™的高温稳定性可确保最大65°C的活动30分钟。抑制剂可以阻止各种核糖核酸的活性,包括中性类型的真核RNase(例如rnases a,b和c)。它不抑制RNases T1,T2,U1,U2,CL3,RNase I和H。抑制剂不含核糖核酸酶和粉状酶,并且通过在75°C的加热15分钟而灭活。
描述:RNase抑制剂是一种重组蛋白,它完全抑制了包括RNase A,B和C在内的广泛的真核RNase,它通过以1:1的比率与高亲和力(4 x 10 -14 m)抑制RNase。它不抑制RNase I,T1,T2,H,U1,U2和CL3。此外,RNase抑制剂没有对聚合酶或逆转录酶活性的抑制作用,因此可用于cDNA合成和一步性RT-PCR反应。RNase抑制剂的鼠版本缺乏在人类版本中鉴定出的一对半胱氨酸,因此它显着提高了对氧化的耐药性。
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核糖核酸酶(RNase)无处不在,可以在许多方面引入实验:例如,在RNA隔离期间的共纯化,裸手和移液器尖端的持久性。这种RNase污染通常不会引起人们的注意。核糖防护RNase抑制剂非常适合对RNA敏感的应用,例如RT-QPCR,因为即使少量RNase也可能不利于最终的实验结果。核糖防护酶抑制剂是一种高效的抑制剂(图1)一系列真核RNass,没有抑制聚合酶或逆转录酶活性(图2),因此可以用于cDNA合成或一步RT-QPCR反应中。
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RNase A是一种用于分子生物学应用的牛胰腺内切核酸酶。RNase A的主要应用是从制备质粒DNA以及提取质粒DNA中去除RNA。它也用于去除非特异性结合的RNA; RNase保护分析; RNA序列的分析以及蛋白质样品中包含的RNA的水解。rNase A在嘧啶核苷酸的3¢磷酸盐处攻击。PG-PG-PC-PA-PG的序列将被裂解以得到PG-PG-PCP和A-PG。最高的活性用单链RNA表现出来。RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。 rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制,这些烷基化存在于酶的活跃部位中。 RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制,这些烷基化存在于酶的活跃部位中。RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A的活化剂包括钾和钠盐。Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质
反义寡核苷酸 (ASO) 已用于调节体内和体外精确 RNA 的表达超过 30 年 [1]。ASO 可通过两种机制发挥作用:激活 RNase H1 来切割 RNA 靶标,或从空间上阻断调节蛋白或核酸接近 RNA(图 1)。RNase H 类内切酶主要在细胞核中起作用,尽管研究表明 RNase H1 在细胞质中也有活性 [2–4]。对于 RNase H1 降解性 ASO,RNase H1 内切酶仅在 RNA 与 DNA(在这种情况下,DNA 残基是 ASO 的一部分)以异源双链形式杂交时才会特异性切割 RNA。一旦发生 RNA 分子切割,ASO 就会解离并多次循环利用以切割新的 RNA 分子 [5,6]。相比之下,立体阻断 ASO (SBO) 经过化学修饰,因此在与 RNA 靶标杂交时不会形成 RNase H1 的底物,通常是通过使用整个 ASO(DNA 除外)中的 2' 修饰 RNA 残基来实现的。相反,SBO 分子会紧密结合单个 RNA 分子,不会发生周转,从而阻碍其他生物分子在该位点进行功能性结合的能力 [ 7–11 ]。本文将重点介绍设计 RNase H1 介导的降解性 ASO 的策略。