已测试至少20 nt。探针可以用3´或5´生物素/Desthiobiotin亲和力组设计,用于链霉亲和素富集(NEB#S1421)。为了获得最佳结果,受保护的DNA:RNA杂交区应为4或5个核苷酸
至少 20 nt 长度的探针已经过测试。探针可以设计为 3´ 或 5´ 生物素/脱硫生物素亲和基团,用于链霉亲和素富集 (NEB #S1421)。为获得最佳效果,受保护的 DNA:RNA 杂交区域应为 4 或 5 个核苷酸
RNase T1 是一种来源于米曲霉 (Aspergillus oryzae) 的核糖核 酸内切酶,可特异性地在单链 RNA 的鸟嘌呤核糖核苷酸 (G) 后进行 切割,产生 3' 磷酸末端。 RNase T1 能够形成核苷 2' , 3'- 环磷酸中 间体,以切割 3'- 鸟苷残基与邻近核苷 5'-OH 基团之间的磷酸二酯键, 产生含末端 3'-GMP 的寡核苷酸和 3'-GMP 。
佩戴合适的手套。根据 EN 374 测试的化学防护手套是合适的。对于特殊用途,建议与这些手套的供应商一起检查上述防护手套的耐化学性。这些时间是 22°C 和持续接触时测量的近似值。由于加热物质、体热等导致的温度升高以及拉伸导致的有效层厚度减小会导致突破时间显著缩短。如有疑问,请联系制造商。在约 1.5 倍大/小的层厚度下,相应的突破时间加倍/减半。数据仅适用于纯物质。当转移到物质混合物时,它们只能被视为指导。
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反义寡核苷酸 (ASO) 已用于调节体内和体外精确 RNA 的表达超过 30 年 [1]。ASO 可通过两种机制发挥作用:激活 RNase H1 来切割 RNA 靶标,或从空间上阻断调节蛋白或核酸接近 RNA(图 1)。RNase H 类内切酶主要在细胞核中起作用,尽管研究表明 RNase H1 在细胞质中也有活性 [2–4]。对于 RNase H1 降解性 ASO,RNase H1 内切酶仅在 RNA 与 DNA(在这种情况下,DNA 残基是 ASO 的一部分)以异源双链形式杂交时才会特异性切割 RNA。一旦发生 RNA 分子切割,ASO 就会解离并多次循环利用以切割新的 RNA 分子 [5,6]。相比之下,立体阻断 ASO (SBO) 经过化学修饰,因此在与 RNA 靶标杂交时不会形成 RNase H1 的底物,通常是通过使用整个 ASO(DNA 除外)中的 2' 修饰 RNA 残基来实现的。相反,SBO 分子会紧密结合单个 RNA 分子,不会发生周转,从而阻碍其他生物分子在该位点进行功能性结合的能力 [ 7–11 ]。本文将重点介绍设计 RNase H1 介导的降解性 ASO 的策略。
西德尼·奥尔特曼发现一种 RNA 可以被另一种 RNA 处理,其作用类似于酶,这一发现在生物学上具有革命性意义,也使他与托马斯·切赫共同获得了 1989 年诺贝尔化学奖。这些突破性的发现支持了 RNA 在分子进化中的关键作用,在地球生命的早期阶段,带有或不带有肽的复制 RNA(和类似的化学衍生物)在原始细胞中发挥作用,这个时代被称为 RNA 世界。在这里,我们介绍了历史背景,重点介绍了奥尔特曼和他的同事的工作,以及随后其他研究人员为了解 RNase P 及其催化 RNA 亚基的生物学功能并将其用作下调基因表达的工具所做的努力。我们主要讨论与细菌 RNase P 相关的研究,但也承认许多团体对我们了解古细菌和真核生物 RNase P 做出了重大贡献,正如本期特刊和其他地方所综述的那样。
描述:RNase抑制剂是一种重组蛋白,它完全抑制了包括RNase A,B和C在内的广泛的真核RNase,它通过以1:1的比率与高亲和力(4 x 10 -14 m)抑制RNase。它不抑制RNase I,T1,T2,H,U1,U2和CL3。此外,RNase抑制剂没有对聚合酶或逆转录酶活性的抑制作用,因此可用于cDNA合成和一步性RT-PCR反应。RNase抑制剂的鼠版本缺乏在人类版本中鉴定出的一对半胱氨酸,因此它显着提高了对氧化的耐药性。
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