衣原体沙眼,一种衣原体,对人类健康的影响最大,是细菌性传播疾病的主要原因,并且在所有Chamydia spp中都可以预防失明。物种。胸部寄生虫的强制性细胞内寄生虫和独特的双相发育周期是开发遗传操作工具的主要障碍。过去十年见证了对气管梭菌的遗传操纵,包括化学诱变,基于II组内含子的靶向基因敲除,荧光报告的等位基因交换诱变(FRAEM),CRISPR干扰(CRISPRI)和最近开发的转载体诱变。在这篇综述中,我们讨论了沙眼梭状芽孢杆菌的遗传操纵的当前状态,并突出了衣原体遗传学新生田中的新挑战。
“基因敲除”或“敲除”是一种使基因功能失活的突变。这些突变对于经典的遗传研究以及包括功能基因组学在内的现代技术非常有用。过去,细菌基因的敲除通常是通过转座子诱变做出的。在这种情况下,需要费力的屏幕才能找到感兴趣的基因的淘汰赛。传统上,首先使用体外基因工程来修改质粒或细菌性人工染色体(BAC)的基因,然后将这些修饰的构建体移至细胞培养技术感兴趣的生物。利用基因工程和体内同源重组的组合的其他方法充其量效率低下。重新组合提供了一种直接在细菌染色体上产生基因敲除突变的新方法,或者将体内任何质粒或BAC修改为在其他生物体中敲除的前奏。构造设计为基础对,
PAT 逆转录转座因子与其他逆转录因子的不同之处在于它们具有“分裂直接重复”结构,即发现内部 300bp 序列重复,每个因子末端约有一半重复。在带有 Northern 印迹的 Panagrellus redivivus 总 RNA 上检测到约 900nt 的非常丰富的转录本,其起始部分映射到 PAT 因子的优先删除部分。潜在对应的 ORF 编码具有羧基末端半胱氨酸基序的 265 个残基的蛋白质,据信这是逆转录因子中 GAG 蛋白的唯一特征。在 Northern 印迹上还检测到一个更暗淡的 1800nt 长的转录本,它位于第一个 ORF 的稍下游。该区域的预测蛋白质序列带有逆转录酶和 RNaseH 的典型基序,如在逆转录因子的 Pol 基因中发现的。肽基序与来自盘基网柄菌的DIRS-1元件最为相似。讨论了使用PAT元件作为秀丽隐杆线虫转座子标记系统的可能性。
CRISPR-Cas(成簇的规律间隔的短回文重复序列 - CRISPR 相关核酸酶)防御系统已多次自然地用于指导 RNA 定向转座。在所有情况下,转座子 Tn7 相关的各种元件都参与了转座。Tn7 严格控制转座;只有当专用靶位选择蛋白识别特殊靶标时,转座酶才会被激活。Tn7 和与 CRISPR-Cas 系统合作的 Tn7 样元件进化出了互补的靶向途径:一条途径识别染色体中高度保守的位点,另一条途径靶向能够进行细胞间转移的移动质粒。Tn7 和 Tn7 样元件将单一整合传递到它们识别的位点,并控制整合事件的方向,为未来用作可编程基因整合工具提供了潜力。早期研究表明,引导 RNA 介导的转座系统可以适应不同的宿主,甚至在微生物群落内,这表明将这些系统设计为强大的基因编辑工具具有巨大的潜力。
摘要|睡美人(SB)转座子是脊椎动物基因转移的有前途的技术平台;但是,其基因插入的效率可能是主要细胞类型中的瓶颈。与第一代转座酶相比,哺乳动物细胞中的大规模遗传筛选产生了效率约100倍的过度转座酶(SB100X)。SB100X在富含造血干或祖细胞的人CD34 +细胞中支持35–50%稳定的基因转移。在免疫缺陷小鼠中基因标记的CD34 +细胞移植导致长期植入和造血重建。此外,SB100X支持体内小鼠肝脏转骨后的生理水平IX的持续(> 1年)表达。最后,SB100X可重复地导致45%稳定的转基因频率通过核心显微注射到小鼠Zygotes中。非病毒基因递送后,新开发的转座酶产生前所未有的稳定基因转移效率,与稳定的转导效率相比,与稳定的转导效率相比,预计在功能基因组学和基因疗法中广泛应用。
5-甲基胞嘧啶 (5mC) 是一种广泛存在的沉默机制,可控制基因组寄生虫。在真核生物中,5mC 在寄生虫控制之外的基因调控中发挥着复杂的作用,但 5mC 也在许多谱系中丢失了。5mC 保留的原因及其基因组后果仍不太清楚。在这里,我们表明与动物密切相关的原生生物阿帕拉契变形虫具有转座子和基因体甲基化,这种模式让人联想到无脊椎动物和植物。出乎意料的是,变形虫中高甲基化的基因组区域源自病毒插入,包括数百种内源化巨型病毒,占蛋白质组的 14%。使用抑制剂和基因组分析的组合,我们证明 5mC 可以抑制这些巨型病毒插入。此外,替代的变形虫分离株显示出多态性巨型病毒插入,突显了感染、内源化和清除的动态过程。我们的结果表明,5mC 对于新获得的病毒 DNA 与真核生物基因组的受控共存至关重要,这使得变形虫成为了解真核生物 DNA 混合起源的独特模型。
5-甲基胞霉素(5MC)是控制基因组寄生虫的广泛的沉默机制。在真核生物中,5MC在寄生虫控制以外的基因调节中发挥了复杂的作用,但在许多谱系中也丢失了5MC。保留5MC的原因及其基因组后果仍然很少理解。在这里,我们表明,与动物的动物Appalachense密切相关的原生物具有转座子和基因体甲基化,这是一种让人联想到无脊椎动物和植物的模式。出乎意料的是,源自病毒插入的变性菌中的高甲基化基因组区域,包括数百种内生巨大病毒,占蛋白质组的14%。使用抑制剂和基因组测定的组合,我们证明5MC使这些巨大病毒插入沉默。此外,替代性变性分离株显示了多态性巨型病毒插入,高光照明动态感染过程,内生源化和净化过程。我们的结果表明,5MC对于新获得的病毒DNA在真核基因组中的控制性至关重要,使变形虫成为了解真核DNA的杂种起源的独特模型。
理解染色质功能对于不清除欧洲核心中基因组调节的复杂性至关重要。染色质的基本亚基是Nu-Cleosome,它是由包裹在八个组蛋白蛋白的DNA形成的。Berger组的研究重点是研究组蛋白变体和重塑剂的进化论和功能,这是染色质调节的关键成分。在去年,Berger组证明了组蛋白变体与组蛋白的翻译后修饰至关重要,从而塑造了染色质指示转录调控。His-Tone变体H2A.X在维修DNA的机械中起着关键作用。Berger Group在拟南芥中确定了这一途径的两个关键参与者。此外,他们还表征了与调节转座活性的特定类型组蛋白变体的沉积相关的染色质重塑剂。最近该组还表明,在陆地植物的进化过程中,翻译后修饰H3K27me3将其靶标从转座子转换为控制基因沉默的顺式元素。H3K27me3的新功能有可能重塑植物的基因组。
Chang 等,2012;Fazili 等,2016;Rossi 等,2018)。研究表明,赋予 hvKp 高毒力表型的最典型的毒力因子由位于毒力质粒上的基因编码,其中包括 iuc/iro(铁载体 aerobactin/salmochelin 的生物合成基因)、rmpA/rmpA2(增加荚膜产量的调节剂)和 peg-344(功能未知的代谢转运蛋白)(Russo and Marr,2019)。因此,大型毒力质粒上毒力基因的丢失将显著降低 hvKp 的毒力。尽管对hvKp毒力机制的研究已经取得了很大进展,但仍有许多问题尚未揭示:例如,毒力基因之间如何相互作用,它们如何调控hvKp的高毒力表型,以及毒力因子如何与宿主免疫系统相互作用。针对hvKp毒力质粒的有效基因编辑方法对于理解这些未知机制至关重要。目前,对hvKp毒力质粒进行基因敲除的报道很少,主要依赖于随机转座子插入和自杀质粒介导的同源重组(Cheng等,2010;
1。摘要2。简介3。经典基因编辑工具4。精确编辑技术的开发4.1单基础编辑器4.2 Prime Editor 4.3双基本编辑技术5。转座子类编辑工具5.1集成5.2铸造6。开发新基因编辑工具6.1 SGN(结构引导的内切酶)6.2 MAD7 6.3 CRISPR-CASφ6.4 SPG和SPRY 7。的挑战和未来观点7.1不同的基因编辑工具存在很高的脱离目标问题,例如提高编辑效率7.2如何实现转座基因编辑工具的应用,例如在动物和工厂中进行整合和铸造7.3如何扩大编辑工具的编辑工具7.4如何启动编辑效率7.5启动eDing of new of ewnely eDITER 7. 5 eN.7 eNEDEN 7.是否能够启动eDing ofer ewnely eDITER,是否可以启动eDing eDITER的copecyme,以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具,是否可以启动编辑工具。各个国家逐渐在完全科学监督的前提下逐渐发布基因编辑的应用,以提高国民生活的质量8。作者贡献9。道德批准并同意参加10。确认11。资金12。利益冲突13。参考