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抗生素
摘要：由于免疫系统失调，败血症构成了重大的全球健康挑战。这篇叙述性评论探讨了抗生素与免疫系统之间的复杂关系，旨在阐明所涉及的机制及其临床影响。从临床前研究中，抗生素表现出各种免疫调节作用，包括调节促炎性细胞因子的产生，与Toll样受体的相互作用，p38/pmk-1途径的调节，抑制基质金属蛋白酶的抑制作用，基因氧化物合成酶的阻断和caspase caspase-apoptase-apoptase-apoptase-apoptase-natiral氧化物的阻断。此外，抗生素诱导的微生物组改变与全身免疫的变化有关，影响细胞和体液反应。败血症患者（尤其是大环内酯类）的抗生素使用抗生素由于其免疫调节作用而引起了人们的注意。但是，比较不同类型的大花环的数据有限。更有力的证据来自有关社区获得性肺炎的研究，尤其是在严重的炎症反应的严重病例中。对败血性休克的研究显示了有关死亡率和免疫反应调节的结果，但在急性呼吸遇险综合征中的大环内酯类药物也观察到了冲突的发现。总而言之，需要根据患者的免疫特征来调整抗生素治疗，以优化败血症治疗中的结果。
多叶速酶抑制剂z ...
多酶抑制剂Z-VAD-FMK充当肽的抑制剂：N-糖酶（NGLY1），一种内糖苷酶，一种内吞糖苷酶，从渗透性降级（ERAD）（ERAD）（ERAD）中裂解N-连接的糖蛋白从糖蛋白（ER）中导出的糖蛋白。NGLY1的Z-VAD-FMK和siRNA介导的敲低（KD）抑制NGLY1的药理学N-聚会酶均诱导HEK 293个细胞中的GFP-LC3阳性点。在任何一种情况下都不观察到ER应力标记物的激活或活性氧（ROS）的诱导。此外，当观察细胞内存储释放时，CA 2 +处理不受影响。在小含量NGLY1抑制或NGLY1 KD的条件下，观察到自噬体形成的上调而不会观察到自噬型伏特的损害。富集自噬体揭示了可比的自噬体蛋白含量。基因本体分析 - 某些IPS表明涉及蛋白质翻译，定位和靶向，RNA降解和蛋白质复合物拆卸的因子的代表过多。自噬的上调代表了对NGLY1抑制或KD的细胞适应，并且在这些条件下，ATG13抑制作用的小鼠胚胎爆炸（MEFS）显示出降低的生存能力。相比之下，用pan-caspase抑制剂Q-VD-OPH处理不会诱导细胞自噬。因此，Z-VAD-FMK的实验因NGLY1抑制作用（包括诱导自噬）而变得复杂，而Q-VD-OPH则代表了一种替代性caspase抑制剂，而没有这种限制。
去泛素化酶USP1在结直肠癌细胞中被ML323自动泛素化和不稳定
目标：我们先前的研究表明，USP1抑制剂ML323在结直肠癌（CRC）细胞中下调了USP1，但特定机制仍然未知。方法：将CRC细胞裂解以进行免疫印迹以检测蛋白质表达。定量实时PCR进行检查以检查mRNA水平。进行了环己酰亚胺追逐测定法，以评估USP1的半衰期。共沉淀用于分析USP1的多泛素化。结果：CRC细胞中蛋白酶体抑制剂MG132增强了USP1蛋白稳定性。野生型USP1被MG132上调，但没有其催化突变体。此外，MG132也增强了USP1的多泛素化，这表明USP1通过泛素蛋白蛋白酶体途径降解。同时，我们证实ML323在CRC细胞中下调了USP1的表达，并且环己酰亚胺追逐测定也显示ML323降低了USP1蛋白质的稳定性。进一步的结果表明，MG132消除了ML323诱导的USP1下调和不稳定。此外，caspase抑制剂Z-VAD并未逆转USP1蛋白的不稳定，这进一步表明ML323诱导的USP1下调并不取决于CRC细胞中细胞死亡的影响。结论：我们的结果表明USP1是自动泛素化的，ML323通过CRC细胞中的泛素蛋白酶体途径不稳定USP1，为抗CRC药物的开发提供了针对USP1的理论基础。关键字：大肠癌，USP1，ML323
线粒体检查点至适应性抗癌免疫
哺乳动物线粒体包含许多分子，这些分子一旦在细胞质或细胞外空间中释放，可介导突出的免疫刺激功能。1 In line with this notion, mitochondrial outer membrane permeabilization (MOMP) as regulated by the balance between pro- and antiapop totic proteins of the Bcl-2 family 2 has been associated with the cytosolic accumulation of potentially interferogenic mitochon drial DNA (mtDNA) and/or mitochondrial RNA (mtRNA) in a number of cell types.3，4然而，细胞色素c，通过通透性线粒体释放的细胞色素（CYC）通常会通过凋亡肽酶激活因子1（APAF1）迅速激活凋亡性胱天蛋白酶（APAF1），从而导致多种免疫疗法的途径，包括（但不限于），包括（不限于），包括（不限制）MTRNNA，MTRNNA是指的 - （IFN）信号传导。5–8 Besides suggesting that at least part of the therapeutic effects of the FDA-approved BCL2 apoptosis regulator (BCL2) inhibitor venetoclax 9 might originate from restored anticancer immunosurveillance, these data support the notion that simultaneously boosting MOMP while inhibiting apoptotic caspase activation may establish a metastable cell state in malignant cells associated with superior免疫刺激作用。我们团队恶魔的最新数据表明，抗凋亡Bcl2还抑制了树突状细胞（DCS）引起适应性免疫反应的能力，对线粒体免疫检查点的普遍免疫抑制功能提供了10贷支持。
MicroRNA-126-3p 抑制 HeLa 细胞增殖，...
摘要。我们之前曾报道，与正常宫颈粘液相比，microRNA 126-3p (miR-126-3p) 在患有明显宫颈癌或癌前病变的患者的宫颈粘液中的含量明显更高。在本文中，我们研究了在宫颈癌细胞系 HeLa 中强制表达 miR-126-3p 对增殖、迁移、侵袭、凋亡和蛋白质表达的影响。我们用 miR-126-3p miRNA 转染 HeLa 细胞，发现这些细胞的增殖、迁移和侵袭（通过细胞计数、伤口愈合、细胞迁移和侵袭测定）相对于用阴性对照模拟物转染的细胞显著降低。在 miR-126-3p 转染的细胞中，磷酸肌醇 3 激酶 (PI3K)、磷酸化 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1 (p-PDK1) 和 p-AKT 蛋白的水平较低。磷酸化 70S6K (p-p70S6K)、磷酸化糖原合酶激酶 3 β (p-GSK3 β )、磷酸化 S6K (p-S6K)、细胞周期蛋白 D1、磷酸化 p21 活化激酶 1 (p-PAK1)、Rho 相关卷曲螺旋蛋白激酶 1 (ROCK1)、肌强直性营养不良相关 CDC42 结合激酶 α (MRCK α ) 和磷脂酶 C γ 1 (p-PLC γ 1) 也下调。这表明 PI3K/PDK1/AKT 通路的下游效应子是 miR-126-3p 抑制的靶标。相反，凋亡相关蛋白，包括 BCL-2 相关细胞死亡激动剂 (Bad)、B 细胞淋巴瘤特大 (Bcl-xL) 和 BCL-2 相关 X (Bax)，均被 miR-126-3p 上调，导致 caspase 3/7 活性增加和细胞凋亡。因此，miR-126-3p 的强制表达
PAN-Caspase抑制剂Q-VD-OPH对人嗜中性粒细胞寿命和功能的影响
人类嗜中性粒细胞是丰富的短寿命白细胞，通过构造凋亡程序以大约10 11个细胞的速度转换。某些生长因子，发炎的介体和感染因子会延迟细胞凋亡或诱导中性粒细胞因其他机制而死。尽管如此，大量数据表明，未经治疗的中性粒细胞的凋亡通常会在细胞分离和体外培养后24小时内发生。在分子水平上的凋亡是由execution子caspase-3驱动的，在此过程细胞促进症和宿主防御函数期间，下调。我们进行了当前的研究，以确定人类嗜中性粒细胞生存力和功能可以通过无毒，不可逆的泛蛋白酶抑制剂q-vd-o-ph-oph延长的程度。我们的数据表明，单个10μm剂量的这种药物足以显着延长细胞寿命。具体而言，我们表明，通过分析核形态，DNA碎片化和苯二烷基丝氨酸外部化以及procaspase-3加工和caspase活性的测量，预防了凋亡至少5天。相反，尽管大量的细胞白血病1（MCL-1），线粒体去极化下降下降。同时，维持谷胱甘肽水平，Q-VD-OPH阻止了与年龄相关的增加线粒体氧化应激。关于功能能力，我们表明吞噬作用，NADPH氧化酶活性，趋化性和脱粒是在Q-VD-OPH处理后保持的，尽管有所不同。因此，单个10μm剂量的Q-VD-OPH可以至少维持人类中性粒细胞活力和功能至少5天。
去泛素化酶抑制剂PR-的抗肿瘤作用...
摘要：软骨肉瘤是一种治疗选择有限的难治性癌症，治疗方法缺乏重大进展。然而，PR-619 是一种新型去泛素化酶抑制剂，已证明在各种恶性肿瘤中具有抗肿瘤作用。本研究旨在研究 PR-619 对软骨肉瘤的体内和体外影响。使用了两种人软骨肉瘤细胞系 SW11353 和 JJ012。使用 MTT 测定法评估细胞活力，而流式细胞术可以检测细胞凋亡和细胞周期进程。进行了蛋白质印迹分析以评估细胞凋亡、细胞应激和内质网 (ER) 应激。此外，使用异种移植小鼠模型检查了 PR-619 的体内抗肿瘤作用。结果表明，PR-619 通过激活 caspase、PARP 切割和 p21 诱导细胞毒性、细胞凋亡和细胞周期停滞在 G0/G1 期。此外，PR-619 通过激活 IRE1、GRP78、caspase-4、CHOP 和其他细胞应激反应（包括 JNK 激活）增加了多泛素化蛋白的积累和 ER 应激。体内分析表明，PR-619 在异种移植小鼠模型中有效抑制肿瘤生长，且毒性极小。这些发现为 PR-619 在人类软骨肉瘤中的抗肿瘤作用和诱导细胞和 ER 应激提供了证据，表明其有可能成为人类软骨肉瘤的一种新治疗策略。
抗CD20单克隆抗体概述
免疫系统相关的效应机制包括补体依赖性细胞毒性 (CDC) 和 Fcγ 受体 (FcγR) 介导的效应。FcγR 在几种免疫细胞上表达，例如中性粒细胞、巨噬细胞和自然杀伤 (NK) 细胞。通过 FcγR 的信号传导会触发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC) 和细胞介导的吞噬作用 (ADCP)。11 补体的经典途径负责 CDC 活性，这是由于 C1q 和利妥昔单抗之间的结合。因此，该连接诱导膜攻击复合物的构成增加、调理作用引起的吞噬活性增强以及其他效应免疫成分的更多募集。12 在 mAb 通过 Fc 区与效应细胞 (FcγRIII) 相互作用后，ADCC 途径驱动由 NK 细胞介导的细胞毒性反应。活化的 NK 细胞通过膜通透性（释放穿孔素颗粒）和诱导程序性细胞死亡（通过颗粒酶 B 引发的 caspase 机制）导致靶细胞死亡。13,14 据报道，CDC 对 ADCC 机制可能产生不利影响，因为两者都竞争 mAb-CD20 复合物。体外研究表明利妥昔单抗具有更强的 CDC 活性；然而，体内模型报告称 ADCC 更有效。15 因此，CDC 对利妥昔单抗抗肿瘤作用的总体影响需要进一步的数据。最后，当 mAb 与巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞表面的其他 FcγR 相互作用时，就会发生 ADCP，从而导致靶细胞的吞噬。
两种新型羟基联苯化合物对恶性黑色素瘤细胞的抗癌活性
摘要：黑色素瘤是最致命的皮肤癌，尽管靶向疗法和免疫疗法取得了进展，但它仍然是最难治疗的癌症之一。大约 50% 的晚期黑色素瘤无法从此类疗法中获益，因此需要新的治疗方法。姜黄素及其类似物已显示出良好的抗癌特性，人们正在考虑将其与最近的疗法联合使用或序贯使用，以改善患者的治疗效果。我们小组之前发表了一种新型姜黄素相关化合物的合成和抗黑色素瘤和神经母细胞瘤细胞的抗癌活性表征 (D6)。这里，从一小部分先前筛选的与 D6 和姜黄素结构相关的 C2 对称羟基联苯化合物中筛选出两种羟基联苯化合物 - 即化合物 11 和 12，它们对黑色素瘤细胞显示出最佳的抗肿瘤潜力（11 的 IC 50 值为 1.7 ± 0.5 µ M，12 的 IC 50 值为 2.0 ± 0.7 µ M），并且对高达 32 µ M 的正常成纤维细胞无毒性。通过进行剂量反应和克隆生长抑制试验，在五种黑色素瘤细胞系中深入表征了它们的抗增殖活性，结果显示这两种化合物都具有持久且不可逆的作用。通过膜联蛋白 V 和 TUNEL 测定确定了细胞凋亡诱导，而蛋白质印迹显示 caspase 活化和 PARP 裂解。用化合物 11 或 12 处理细胞后，细胞周期分析显示 G2/M 转换停滞。综合所有这些证据，11 和 12 被证明是开发针对恶性黑色素瘤的新型抗癌药物的良好候选先导化合物。
CRISPR 共编辑策略实现无疤痕同源性......
摘要：成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/Cas9 通过提供一种简单而强大的方法来切割特定的基因组序列，彻底改变了基因组编辑。然而，在目标位点引入模板化变化通常需要同源定向修复 (HDR)，而这种修复仅在培养的一小部分细胞中起作用。为了富集 HDR 依赖性编辑细胞，我们采用了一种共同编辑策略，即在挽救内源性预制温度敏感 (ts) 突变的同时编辑目标基因 (GOI)。通过使用 ts 突变的修复作为可选择标记，由于编辑会恢复野生型 (wt) 序列，因此选择是“无疤痕的”。为了验证原理，我们使用了 HEK293 和 HeLa 细胞，这些细胞在必需的 TAF1 基因中发生了 ts 突变。 CRISPR 联合编辑 TAF1ts 和 GOI 可使高达 90% 的耐高温细胞携带 GOI 中的所需突变。我们使用该系统插入由质粒供体编码的大盒和由单链寡核苷酸供体 (ssODN) 编码的较小变化。值得注意的是，我们编辑的基因之一是在蛋白酶体亚基 PSMB6 中引入 T35A 突变，从而消除其 caspase 样活性。编辑后的细胞显示出这种活性的特定降低，证明了该系统在生成具有内源基因生物学相关突变的细胞系中的实用性。这种方法提供了一种快速、高效且无疤痕的方法来选择需要 HDR 的基因组编辑细胞。