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系统地减弱 DNA 靶向使 CRISPR 成为可能......
。CC-BY-NC 4.0 国际许可下可用（未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2022 年 9 月 14 日发布。；https://doi.org/10.1101/2022.09.14.507927 doi：bioRxiv 预印本
我们创建的空间使非凡的事物成为...
我们负责任的Segro框架着重于三个长期优先事项，我们认为我们可以做出最大的业务，环境和社会贡献。对于这些领域的每个领域，我们都建立了与六个非金融KPI相关的具有挑战性的目标，并与所有员工的年度奖金相关。我们每年报告我们的进度，我们将根据需要设定其他，更具体的支持目标，我们希望我们的行动和方法随着时间的流逝而发展，以反映我们的成就，技术变革以及利益相关者和更广泛的社会的优先事项。
一种高度特异性的 CRISPR-Cas12j 核酸酶能够使等位基因
CRISPR-Cas 系统可通过非同源末端连接 (NHEJ) 基因破坏突变等位基因来治疗常染色体显性遗传病。然而，目前的 CRISPR-Cas 系统无法将许多单核苷酸突变与野生型等位基因区分开来。在这里，我们对六种 Cas12j 核酸酶进行了功能性筛选，并确定 Cas12j-8 是一种具有超紧凑尺寸的理想基因组编辑器。Cas12j-8 表现出与 AsCas12a 和 Un1Cas12f1 相当的活性。Cas12j-8 是一种高度特异性的核酸酶，对原间隔区相邻基序 (PAM) - 近端区域中的单核苷酸错配敏感。我们通过实验证明 Cas12j-8 能够对具有单核苷酸多态性 (SNP) 的基因进行等位基因特异性破坏。Cas12j-8 识别简单的 TTN PAM，可提供高靶位点密度。计算机模拟分析显示，Cas12j-8 能够对 ClinVar 数据库中的 25,931 个临床相关变异和 dbSNP 数据库中的 485,130,147 个 SNP 进行等位基因特异性破坏。因此，Cas12j-8 特别适合用于治疗应用。
不完美引导 RNA (igRNA) 使 CRISPR 单...
CRISPR 碱基编辑技术倾向于编辑目标区域中的多个碱基，这限制了精确恢复疾病相关的单核苷酸多态性 (SNP)。我们设计了一种不完美 gRNA (igRNA) 编辑方法，该方法利用具有一个或多个与目标基因座不互补的碱基的 gRNA 来引导碱基编辑生成单碱基编辑产物。碱基编辑实验表明，与正常 gRNA 编辑相比，使用 CBE 的 igRNA 编辑大大增加了单碱基编辑分数，并且编辑效率更高。使用腺嘌呤碱基编辑器 (ABE) 也获得了类似的结果。在 DNMT3B、NSD1、PSMB2、VIATA hs267 和 ANO5 等基因座上，实现了近乎完美的单碱基编辑。通常，可以使用简单的协议从一组少数 igRNA 中选择具有良好单碱基编辑效率的 igRNA。作为概念验证，本研究使用 igRNA 构建了导致原发性高草酸尿症的疾病相关 SNP 细胞系。这项工作提供了一种使用 ABE 和 CBE 实现单碱基碱基编辑的简单策略，并克服了限制碱基编辑器用于治疗 SNP 相关疾病或创建携带疾病相关 SNP 的细胞系和动物模型的关键障碍。
合成细胞因子受体能够增强持久性......
保护同种异体细胞：• 多周期淋巴细胞清除 • 同种异体细胞治疗产品的复杂基因编辑 – 多基因 KO 和 KI • 抗体依赖性清除以减少淋巴细胞数量
主动纠缠可实现随机、拓扑抓取
Kaitlyn Becker，1，2 Clark Teeple，1 Nicholas Charles，1 Yeonsu Jung，1 Daniel Baum，3，James C. Weaver，1，4 L. Mahadevan，1，5 ∗ Robert Wood 1 ∗
RecT 重组酶表达可实现高效的基因...
摘要 屎肠球菌是一种普遍存在的革兰氏阳性细菌，可从环境、食物和哺乳动物的微生物群中分离得到。屎肠球菌的共生菌株可对宿主的生理和免疫产生有益影响，但抗生素的使用已从牲畜和人类中产生了抗生素耐药性和致病性分离株。然而，由于基因编辑方法效率低下，对屎肠球菌功能和机制的解析受到限制。为了解决这些限制，我们在此报告，屎肠球菌 RecT 重组酶的表达可显著提高重组工程技术在屎肠球菌的共生菌株和抗生素耐药菌株以及其他肠球菌种（如 E. durans 和 E. hirae）中的效率。值得注意的是，RecT 与成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)-Cas9 和向导 RNA (gRNA) 的结合表达能够实现高效的无瘢痕单链 DNA 重组，从而在屎肠球菌中产生特定的基因编辑突变体。此外，我们证明屎肠球菌 RecT 表达促进了编码抗生素选择标记的双链 DNA 模板的染色体插入，从而产生了基因缺失突变体。作为进一步的原理证明，我们使用 CRISPR-Cas9 介导的重组敲除屎肠球菌中的两个分选酶 A 基因，以进行下游功能表征。此处描述的通用 RecT 介导的重组方法应能显著增强对屎肠球菌和其他密切相关物种的遗传研究，以进行功能和机制研究。
StemMACS™ PSC-Brew XF 可实现稳定高效的...
如今，人类多能干细胞 (hPSC) 经常用于基因编辑或细胞分选等极具挑战性的应用。在重新编程后，通过应用超低密度接种来产生新的 hPSC 系，使细胞处于压力之下。显然，需要一个稳定且精心组成的培养基环境来确保 hPSC 的存活和正常细胞生长，尤其是在压力实验条件下。细胞受益于恒定的营养和生长因子供应、稳定的 pH 值和低降解产物（例如乳酸或铵）的积累。在这里，我们开发了一种不含异种成分的新一代 hPSC 培养基，该培养基含有稳定的 FGF-2，可确保生长因子的稳定暴露水平，因此不仅可以提高 hPSC 的有效维持和扩增，还可以提高安全使用灵活喂养策略的可能性。当与额外的优化支持补充剂结合使用时，它可以提高细胞存活率和稳定细胞
量子点自组装实现低阈值激光
钙钛矿量子点 (QD) 是溶液处理激光器所关注的焦点；然而，它们的俄歇寿命较短，限制了激光操作主要在飞秒时间范围内进行，在纳秒范围内实现光学增益阈值的光激发水平比在飞秒范围内高出两个数量级。本文作者报告了 QD 超晶格，其中增益介质促进激子离域以减少俄歇复合，并且结构的宏观尺寸提供激光所需的光学反馈。作者开发了一种自组装策略，该策略依赖于钠——一种钝化 QD 表面并诱导自组装以形成有序三维立方结构的组装导向器。考虑 QD 之间吸引力的密度泛函理论模型可以解释自组装和超晶格的形成。与传统的有机配体钝化量子点相比，钠具有更高的吸引力，最终导致微米级结构和反馈所需的光学刻面的形成。同时，新配体使点间距离减小，增强了量子点之间的激子离域，动态红移光致发光就是明证。这些结构充当激光腔和增益介质，实现阈值为 25 μ J cm –2 的纳秒级持续激光。