用1%RIPA裂解缓冲液(Elabscience Biotechnology Co.,Ltd,Ltd,Wuhan,中国)提取HCMEC的总蛋白质,并具有磷酸化抑制剂(MCE)。蛋白质浓度,并通过12%SDS-PAGE分离30 µg蛋白质样品,然后转移到PVDF膜(Millipore,Billerica,MA,美国)。在室温下用5%非脂肪干牛奶用5%的非脂肪干牛奶阻塞膜,并在4°C下与一抗的一抗孵育过夜。随后,将膜与相应的二抗在室温下孵育2小时。使用增强的化学发光检测系统(ECL系统; Millipore,Billerica,MA,USA)可视化的蛋白质条带。ImageJ软件用于量化Western blot数据。
1 图卢兹癌症研究中心,INSERM U1037—图卢兹第三大学-保罗萨巴蒂尔—CNRS ERL5294,F-31037 图卢兹,法国;domenico.sorrentino@inserm.fr(DS);Julie.frentzel@merckgroup.com(JF);geraldine.mitou@orange.fr(GM);avedis.torossian@univ-tlse3.fr(AT);coralie.ha2@gmail.com(CH-A.);fabienne.meggetto@inserm.fr(FM);stephane.manenti@inserm.fr(SM);estelle.espinos@inserm.fr(EE)2 波士顿儿童医院和哈佛医学院病理学系,波士顿,马萨诸塞州 02115,美国;Rafael.BlascoPatino@childrens.harvard.edu(RBB); Pighi.chiara@gmail.com (CP); roberto.chiarle@childrens.harvard.edu (RC) 3 Ligue Nationale Contre le Cancer,é quipe labellis é e 2016,F-31037 图卢兹,法国 4 欧洲 ALK 相关恶性肿瘤研究计划 (ERIA),剑桥 CB2 0QQ,英国 5 Merck Serono SA,生物技术过程科学系,Route de Fenil 25, ZI B, 1804 Corsier-sur-Vevey, 瑞士 6 都灵大学分子生物技术与健康科学系, 10126 都灵, 意大利 7 CRCT 技术中心—Plateau de Cytomé trie et Tri cellulaire—INSERM U1037, F-31037 图卢兹,法国; manon.farce@inserm.fr 8 TRANSAUTOPHAGY:欧洲自噬知识多学科研究与转化网络,COST Action CA15138,08193 巴塞罗那,西班牙 * 通信地址:sylvie.giuriato@inserm.fr;电话:+ 33-(5)-82-74-16-35 † 这些作者对这项工作做出了同等贡献。
OFT 的主要优势之一是,对于吞咽困难的人(例如儿童、老人和患有某些疾病(例如吞咽困难)的患者)来说,它们易于服用。OFT 具有快速的口腔崩解性,这可以提高生物利用度并更快地开始起效,特别是对于水溶性低的药物。由于药片的灵活性,患者可以调整剂量以适应其独特的治疗需求。这对于需要根据患者特征或疾病阶段定制剂量的药物尤其有用。溶解度有限、稳定性低或需要特定释放曲线的活性化合物都可以使用 OFT。这使它们有资格用于各种
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[图 1] 中心法则概述 该图显示了中心法则,其中遗传信息从 DNA 到 RNA,然后从 RNA 到蛋白质单向传递。 DNA以碱基序列的形式存储遗传信息,mRNA(信使RNA)通过转录合成。 mRNA 由核糖体翻译,
植物的发育和繁殖是一个复杂的过程,在这个过程中,一个个体完成其生命周期,从发芽、新器官的形成和生长开始,导致生殖结构的形成,并最终终止于下一代的产生。这些机制是长期进化历史的结果,导致了涉及多层次调节器的复杂调节机制。微小RNA(miRNA)是一类小调节分子,通过负面控制靶基因在调控网络中发挥关键作用。自二十年前首次发现miRNA以来,它们作为植物发育的重要调节器的作用引起了人们的极大兴趣。在这篇评论中,我们提出了对miRNA在植物发育和繁殖过程中的重要性的全面和批判性分析。我们首先介绍目前对 miRNA 的进化史、生物发生、作用方式、在调控网络中的位置以及它们作为移动分子的潜力的理解,探索这些方面如何有助于它们在植物发育和繁殖中发挥作用。然后,我们探索用于有效分析其作用的遗传策略,重点关注基因组编辑技术的最新进展。接下来,我们重点关注 miRNA 对四个关键过程的贡献:生长、器官模式和身份、生命周期进展和繁殖。通过这种分析,miRNA 在植物发育和繁殖过程中的重要性显现出来,最后我们根据目前对 miRNA 在动物发育过程中的作用的看法进行讨论。
图3。miRNA储物柜的miRNA抑制作用的验证。(a)示意图表示miR-214对癌细胞EMT过程的影响。两个miRNA储物柜LC-1和LC-2有望通过阻止miR-214对EMT促进蛋白的RNF8的抑制作用来促进EMT。(b)IP-PCR分析确定miRNA储物储物在A549细胞中与靶microRNA的结合能力。启动设计的示意图表示,Hago2代表了表达质粒的标志标记的人AGO2,输入表示总DNA的等分试样。用于免疫沉淀的抗体在泳道上方指示。(c)RT-QPCR结果证明了用miR-214储物柜LC-C(作为对照)/LC-1/LC-1/LC-2或miR-214 Antagomir(AN-214)/Antagomir对照(ANANTAGOMIR对照)转染的A549细胞中miR-214的丰度。(d)用miR-214储物柜LC-C/LC-1/LC-2或Antagomir AN-214/AN-C转染的A549细胞中RNF8表达水平的蛋白质印迹。 (e)用miR-214储物柜LC-C/LC-1/LC-2或Antagomir AN-214/AN-C转染的A549细胞中迁移的Transwell分析。 (F)CCK8分析表明用miR-214储物柜LC-C/LC-1/LC-2转染的A549细胞的增殖。使用2-ΔΔCT方法计算了相对基因表达,并在每组内针对U6 snRNA的基因初始归一化。对照组(LC-C或AN-C)中每个基因的表达水平
hirschsprung疾病(HSCR)的特征是胃肠道中没有神经节细胞的先天性缺失,从而导致排便,便秘和肠梗阻受损。当前的HSCR诊断是基于直肠吸力活检(RSB),这在新生儿中可能很复杂。有时会延迟诊断会增加临床并发症的风险。因此,有新的非侵入性诊断方法是客观的,更可行的,并且为潜在的手术干预提供了更早的基础。近年来,MicroRNA(miRNA)已成为相关的早期标志物的重点,该标志物可以提供对疾病的病因和进展的更多见解。因此,在寻找非侵入性HSCR生物标志物时,我们分析了HSCR患者尿液样品中的miRNA表达。使用微阵列的5例HSCR患者的结果显示,HSA-MIR-378 H,HSA-MIR-210-5P,HSA-MIR-6876-3P,HSA-MIR-634和HSA-MIR-634和HSA-MIR-6883-3P是最上升的miRNA;而HSA-MIR-4443,HSA-MIR-22-3P,HSA-MIR-4732-5P,HSA-MIR-3187-5P和HSA-MIR-371B-5P最下调的miRNA。在mirnawalk和mirdb数据库中进一步搜索表明,这些失调的miRNA肯定鉴定出靶标HSCR相关基因,例如RET,GDNF,BDNF,BDNF,EDN3,EDNRB,ERBB,ERBB,NRG1,NRG1,SOX10;以及神经元迁移和神经发生中暗示的其他基因。最后,我们还可以通过RT-QPCR验证HSCR尿中的一些miRNA变化。总的来说,我们的分析的HSCR队列表现出失调的miRNA表达表达,可以在尿液中检测到。我们的发现为将来使用特定的尿液miRNA特征作为非侵入性HSCR诊断方法开辟了可能性。
抽象背景/目的:胆管癌(CCA)是一种恶性和阴险的肿瘤,很难治疗。长的非编码RNA(LNCRNA)linc01123是一种生物分子,通过通过影响microRNA在基因表达中的调节功能来调节基因表达来影响癌症的进展。因此,这项研究研究了Linc01123与CCA之间的联系,并探讨了谎言机制。这项研究的目的是提供有关CCA管理的有价值的信息。材料和方法:在这项研究中收集了128名CCA患者中的肿瘤和正常帕拉卡氏菌组织样品。为测量LINC01123和miR-641表达特征,使用了定量逆转录 - 聚合酶链反应。使用了LINC01123和miR-641在CCA细胞中的生物学功能,使用了细胞计数KIT-8(CCK-8)以及Transwell迁移和入侵分析。使用双荧光素酶报告基准测定法和救援实验研究了该机制。结果:这项研究发现,在CCA组织和细胞中LINC01123的表达水平高于正常组织和细胞中的表达水平。linc01123促进了CCA细胞的增殖,迁移和侵袭能力,因此成为CCA中淋巴结转移和晚期TNM阶段的指标。此外,miR-641的表达与linc01123的表达负相关。linc01123通过下调miR-641影响了CCA的进展。结论:CCA肿瘤组织和细胞中LINC01123的上调。linc01123通过目标miR-641促进了CCA加重。linc01123可能是CCA将来治疗的目标。关键字:胆管癌,HCCC9810,HUCCT1,LINC01123,mir-641
最受欢迎的传统临床生物标志物评估肾脏功能和糖尿病肾脏疾病(DKD)的鉴定,包括血清肌酐(SCR),肾小球滤过率(EGFR),尿白蛋白肌酐比率(UACR)和白蛋白尿尿症检测[7,8]。即使存在这些传统标记,及时,精确的DN诊断也存在重大障碍。最近的研究表明,大约30%的DN患者没有蛋白尿[9]。此外,在DN患者中,特别是在T2D中,在没有蛋白尿的情况下,GFR的降低。相反,这些患者以严重降低的GFR降低了慢性肾脏疾病(CKD),而没有从微藻尿症过渡到明显的蛋白尿[10]。并非特定于DKD的存在,也可能发生在其他疾病中[11]。由于DN的早期诊断对于防止该疾病的发展至关重要,因此近年来已经努力引入新的DN诊断标记。最近的研究表明,非编码RNA(NCRNA),尤其是microRNA(miRNA)和长期编码RNA(LNCRNA)参与DN的发作和进展[12-14]。LNCRNA和miRNA之间的相互作用,称为miRNA海绵或竞争性内源性RNA(CERNA),可以减少miRNA对mRNA的抑制作用,从而防止靶基因抑制[15]。此外,NCRNA可以作为一种新型敏感和无创的诊断生物标志物来预测DN进展,因为它们在体液,组织和组织和细胞特异性表达曲线上的稳定性很高[16,17]。