随着预期寿命和事故的不断升高,对骨骼再生溶液的临床需求正在扩大。正在研究几种策略,以增强干细胞的成骨分化。我们以前在单层和三维细胞培养中报道了两种不同的方法。第一种方法是基于使用分化培养基之前使用5-Aza-DC(DNA甲基化抑制剂)进行预处理的细胞。第二种方法基于分化过程中玻璃表面上的培养细胞。在这项研究中,我们研究了将这两种方法结合起来的潜在效果。我们的结果表明,两种方法都与降低全球DNA甲基化水平有关。在玻璃表面上培养为单层的细胞在第10天显示碱性磷酸酶活性增强,而5-Aza-DC预处理可增强第5天的活性,而与培养表面无关。在三维颗粒库中,5-aza-DC预处理通过runx-2和tgf-β1上调增强了成骨,而玻璃表面诱导了osterix。此外,在玻璃上培养的颗粒表现出一组miRNA的上调,包括促骨生成miR -20a和miR -148b和抗稳定生成miR -125b,mir -31,mir -138和mir -133a。有趣的是,5-AZA-DC与在组织培养塑料上培养的细胞中miRNA的变化无关,但将玻璃上上调的miRNA恢复到基础水平。这项研究确认了增强成骨分化的两种方法,并与它们的组合相矛盾。