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改进的 gRNA 二级结构允许编辑抵抗 CRISPR-Cas9 切割的靶位
CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑的第一步是切割与 CRISPR 向导 RNA (gRNA) 中所谓的间隔序列互补的目标 DNA 序列。然而，一些 DNA 序列对 CRISPR-Cas9 切割具有抵抗性，这至少部分是由于 gRNA 折叠错误造成的。为了解决这个问题，我们设计了 gRNA，使其恒定部分具有高度稳定的发夹结构，并通过化学修饰进一步增强了它们的稳定性。“基因组编辑优化锁定设计”(GOLD)-gRNA 将基因组编辑效率提高了约 1000 倍（从 0.08% 到 80.5%），其他不同靶标的平均效率提高了 7.4 倍。我们预计，无论间隔序列组成如何，这种改进的 gRNA 都将实现高效编辑，并且在所需的基因组位点难以编辑时将特别有用。
改进的 gRNA 二级结构允许编辑抵抗 CRISPR-Cas9 切割的靶位
CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑的第一步是切割与 CRISPR 向导 RNA (gRNA) 中所谓的间隔序列互补的目标 DNA 序列。然而，一些 DNA 序列对 CRISPR-Cas9 切割具有抵抗性，这至少部分是由于 gRNA 折叠错误造成的。为了解决这个问题，我们设计了 gRNA，使其恒定部分具有高度稳定的发夹结构，并通过化学修饰进一步增强了它们的稳定性。“基因组编辑优化锁定设计”(GOLD)-gRNA 将基因组编辑效率提高了约 1000 倍（从 0.08% 到 80.5%），其他不同靶标的平均效率提高了 7.4 倍。我们预计，无论间隔序列组成如何，这种改进的 gRNA 都将实现高效编辑，并且在所需的基因组位点难以编辑时将特别有用。
通过 Cas12a/CBE 共编辑在 T0 代中产生无转基因抗溃疡病 Citrus sinensis cv. Hamlin
柑橘溃疡病影响柑橘生产。该病由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起。先前的研究证实，在 Xcc 感染期间，转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4 会从病原体转移到宿主植物细胞中。PthA4 与溃疡病易感基因 LOB1（EBE PthA4 -LOBP）启动子区中的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，随后引起溃疡症状。之前，采用 Cas12a/CBE 共编辑方法破坏高度纯合的柚子的 EBE PthA4 -LOBP。然而，大多数商业柑橘品种都是杂合杂交种，更难产生纯合/双等位基因突变体。在这里，我们采用 Cas12a/CBE 共编辑方法来编辑 Hamlin（Citrus sinensis）的 EBE PthA4 -LOBP，这是一种在世界范围内种植的商业杂合柑橘品种。构建了二元载体 GFP- p1380N-ttLbCas12a:LOBP1-mPBE:ALS2:ALS1，并证明其可通过 Xcc 促进的农杆菌素过滤在 Hamlin 叶片中发挥作用。该构建体允许通过 GFP 选择无转基因再生体，编辑 ALS 以生成抗氯磺隆再生体作为基因组编辑的选择标记，这是通过 nCas9-mPBE:ALS2:ALS1 瞬时表达 T-DNA 的结果，并通过 ttLbCas12a 编辑感兴趣的基因（即本研究中的 EBE PthA4 -LOBP），从而产生无转基因柑橘。共产生了 77 株幼苗。其中 8 株幼苗为转基因植株（#Ham GFP 1 - #Ham GFP 8），4 株幼苗为非转基因植株（#Ham NoGFP 1 - #Ham NoGFP 4），其余为野生型。在 4 株非转基因幼苗中，三个品系（#Ham NoGFP 1、#Ham NoGFP 2 和 #Ham NoGFP 3）含有 EBE pthA4 的双等位基因突变，一个品系（#Ham NoGFP 4）含有 EBE pthA4 的纯合突变。我们在 C. sinensis cv. Hamlin 中实现了 EBE PthA4 – LOBP 的 5.2% 非转基因纯合/双等位基因突变效率，而之前研究中柚子的突变效率为 1.9%。重要的是，存活下来的 4 株无转基因植株和 3 株转基因植株均能抵抗柑橘
ephb4-磷蛋白-B2是抑制前列腺癌的靶标
背景：PI3K途径激活是前列腺癌的常见和早期事件，来自PTEN中功能突变的丧失或在PIK3CA或AKT中激活突变，导致组成型激活，诱导生长因子受体受体激酶EPHB4及其配体Ephrin-B2。我们假设诱导EPHB4是肿瘤启动所需的早期事件。其次，我们假设当前列腺癌独立于雄激素时，EPHB4仍然相关。方法：前列腺上皮中有条件PTEN缺失的遗传小鼠模型诱导所有小鼠的肿瘤。我们针对EPHB4野生型测试了该模型，并在前列腺上皮中删除。这使我们能够测试其在肿瘤开始中的作用。我们还通过使用诱饵可溶性EPHB4来阻断由Ephb4-磷蛋白-B2相互作用引起的双向信号传导测试了正交方法。EPHB4-磷蛋白-B2在雄激素剥夺小鼠中的作用在难治性癌症模型中的作用进行了测试。结果：PTEN缺失在前列腺癌中诱导Ephb4和Ephrin-B2，当在同一前列腺上皮细胞中删除EPHB4时，它大大降低了。SEPHB4-ALB融合蛋白具有改进的药代动力学类似地抑制了肿瘤的形成，从而确立了在肿瘤启动中的作用。sephb4-alb保留了抗Cantatration抗抑制雄激素独立前列腺癌的效率。因此，我们已经观察到，在PTEN NULL小鼠中启动前列腺癌需要诱导EPHB4，并且在雄激素剥夺中需要从EPHB4下游的信号传导，从而需要抑制前列腺癌。EPHB4途径的药理抑制作用再现了结果。 靶向EPHB4应在前列腺癌中进行测试，尤其是那些对雄激素剥夺疗法有抵抗力的人。 结论：ephb4和ephrin-b2受体配体对PTEN null前列腺癌被诱导，这显着促进了肿瘤起始。 其次，即使在雄激素剥夺中，EPHB4-磷蛋白-B2途径也会继续促进肿瘤进展，从而激素难治性肿瘤。 EPHB4-磷蛋白-B2可能是精密药物的候选者，具有基于生物标志物的患者选择，没有和不同时护理标准。EPHB4途径的药理抑制作用再现了结果。靶向EPHB4应在前列腺癌中进行测试，尤其是那些对雄激素剥夺疗法有抵抗力的人。结论：ephb4和ephrin-b2受体配体对PTEN null前列腺癌被诱导，这显着促进了肿瘤起始。其次，即使在雄激素剥夺中，EPHB4-磷蛋白-B2途径也会继续促进肿瘤进展，从而激素难治性肿瘤。EPHB4-磷蛋白-B2可能是精密药物的候选者，具有基于生物标志物的患者选择，没有和不同时护理标准。
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我们感兴趣地阅读了吉尔伯特·霍尼格菲尔德（Gilbert Honigfeld）的文章，标题为“耐药精神分裂症中的氯氮平：谁设计了美国著名的美国临床试验？”（Honigfeld，2023）发表在本期特刊上。当前文章的第一作者 - 也在参加会议上，他意识到40年是很长的时间，并且记忆可能会受到各种因素的影响。Herb Meltzer和第一作者参加了在美国食品药品管理局（FDA）总部与杰克·辛格（Jack Singer）举行的参考会议。两位外部顾问（Kane和Meltzer）被要求作为学术专家，以由Sandoz参加的高级人员杰克（Jack）积极地为讨论做出贡献。通常，制药公司参与学术专家设计临床试验甚至与FDA会面的过程。对话比Honigfelds的文章所传达的更具参与性和亲切性。这绝不是他和保罗·列伯（Paul Leber）所描绘的单方面“竞赛”。所有会议参与者提出了建议，其中一些是在文章所讲述的四个关键领域中实施的，保罗·列伯（Paul Leber）是一个非常体贴和令人鼓舞的存在，而不是以任何方式进行对抗。（本文的第一作者与保罗·列伯（Paul Leber）紧密合作，并
依维莫司和氯霉素专门针对CMS4亚型的化学抗性结直肠癌细胞
结直肠癌（CRC）可以分为四个共有的分子亚型（CMS），其中CMS1的预后最佳，与CMS4形成鲜明对比，CMS4的结果最差。CMS4 CRC众所周知，如临床前研究和回顾性临床观察表所证明的那样，对治疗干预具有抵抗力。 在这里，我们报告了发现两种临床雇用的药物，依维莫司（EVE）和普里卡米霉素（PLI），有效地针对原型CMS4细胞系MDST8。 与原型CMS1细胞系LOVO相比，用EVE或PLI处理的MDST8细胞表现出更强的细胞抑制作用和细胞毒性作用，凋亡和自噬的迹象增加，并且对DNA-TO-RNA转录和RNA-RNA-RNA-to-rna-to-prot蛋白翻译的抑制更为明显。 此外，EVE和PLI的无毒剂量诱导了小鼠MDST8肿瘤的收缩，但对LOVO肿瘤的肿瘤减少较小。 总的来说，这些结果表明，应评估EVE和PLI对CMS4 CRC的临床活性。CMS4 CRC众所周知，如临床前研究和回顾性临床观察表所证明的那样，对治疗干预具有抵抗力。在这里，我们报告了发现两种临床雇用的药物，依维莫司（EVE）和普里卡米霉素（PLI），有效地针对原型CMS4细胞系MDST8。与原型CMS1细胞系LOVO相比，用EVE或PLI处理的MDST8细胞表现出更强的细胞抑制作用和细胞毒性作用，凋亡和自噬的迹象增加，并且对DNA-TO-RNA转录和RNA-RNA-RNA-to-rna-to-prot蛋白翻译的抑制更为明显。此外，EVE和PLI的无毒剂量诱导了小鼠MDST8肿瘤的收缩，但对LOVO肿瘤的肿瘤减少较小。总的来说，这些结果表明，应评估EVE和PLI对CMS4 CRC的临床活性。
耐药抑郁症的建议
1 Fundamental Foundation, Creteil, France, 2 Adult Medical Psychiatry and Medical Psychology Service (Department of Psychiatry and Adult Medical Psychology), Fundamental Resistant Depression Expert (Fundamental Advanced Center of Experture in Resistant Depression, CHU de Toulouse (University Hospital Center), Purpan Center, Tonic Toulouse Neuroimaging Center, University of Toulouse (Toulouse University), Inserm, UPS, Toulouse, France, 3精神病学服务，基本抗抑郁症中心，CIC-1431 INSERM，BUSANçonChu，Burgundy FrancheComté大学，法国4 Inserm U1028 7 U1253, Ibrain, CIC1415, INSERM, CHRU de Tours (Regional University Hospital Center), University of Tours, France, 8 Department of Emergency Psychiatry and Acute CARE, CHU Montpellier, Inserm U1061, Montpellier University, Montpellier, France, 9 Pole of general and university psychiatry, Center Expert Depression Résistant Fundamental, CH Charles Perrens,波尔多，营养和神经生物学实验室（综合
在家禽，牲畜，鱼类和相关环境中，多药耐药的proteus mirabilis分布：一种健康
Corresponding Authors: Bilal Aslam E-mail: b.aslam@qu.edu.sa Sulaiman Aljasir E-mail: s.aljasir@qu.edu.sa Received: 12-12-2024, Accepted: 22-01-2025 , Published online: 19-02-2025 Co-authors: AS: ayesha.sarwar@gcuf.edu.pk, SMa: saramahmood@gcuf.edu.pk, SMu: saimamuzammil@gcuf.edu.pk, ABS: absiddique@gcuf.edu.pk, FS: fatimasarwar15@gmail.com, MK: mohsinkhurshid@gcuf.edu.pk, MHR: drmhrasool@gcuf.edu.pk, JS: j.sasanya@iaea.org如何引用：Sarwar A，Aslam B，Mahmood S，Muzammil S，Siddique AB，Siddique AB，Sarwar F，Sarwar F，Khurshid M，Rasool M，Sasanya J，Sasanya J和Aljasir S（2025）兽医世界，18（2）：446–454。版权所有：Sarwar等。本文是根据Creative Commons Attribution 4.0国际许可条款（http://creativecommons.org/licenses/ by/4.0/）
全基因组筛选确定了治疗索拉非尼耐药性肝细胞癌的新靶点
浙江大学医学院附属邵逸夫医院普通外科蔡秀军课题组领导的研究通过CRISPR/cas9系统对索拉非尼治疗下的肝癌细胞（HepG2）全基因组进行筛选，筛选出了在索拉非尼耐药中占主导地位的基因：KEAP1。KEAP1调控的下游分子Nrf2是细胞抵抗活性氧（ROS）的重要分子。本研究首先通过KEAP1/Nrf2基因编辑检测索拉非尼在肝癌细胞中的IC 50 等大量功能性实验，验证了KEAP1-Nrf2轴在索拉非尼耐药中的作用。本研究发现一种名为ML385的特异性Nrf2小分子抑制剂在体内和体外均能增强索拉非尼的杀伤作用。