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World File Search System化脓性
CRISPR-Cas 之旅：扮演生命之神
绝大多数生物体中的 DNA 是生命的分子蓝图。DNA 中以序列形式存在的遗传密码首先以 RNA 的形式复制，然后进一步翻译为蛋白质。蛋白质在细胞中发挥结构或生化功能。1953 年，JD Watson 和 FHC Crick 报道了 DNA 的分子结构 [1]。从那时起，科学家们就一直试图开发能够操纵细胞和生物体遗传物质的技术。随着我们从细菌等低等生物转向人类等高等生物，基因操作变得越来越复杂和难以实现。许多生物体已被证明在遗传上难以处理，因为在这些生物体中基因操作仍然难以实现。随着 RNA 引导的 CRISPR-Cas9 系统的发现，一种简单有效的基因组工程方法现已成为现实。这项技术的发展使科学家能够修改各种细胞和生物体中的 DNA 序列，从而有可能改变生命的密码。基因组操作不再是实验瓶颈。如今，CRISPR-Cas9 技术已广泛应用于基础科学、生物技术和未来疗法的开发 [2]。法国微生物学家、德国柏林马克斯·普朗克病原体科学中心主任 Emanuelle Charpentier 和美国生物化学家、美国加州大学伯克利分校教授兼霍华德·休斯医学研究所研究员 Jennifer A. Doudna 因开发出一种基因组编辑方法而共同获得了 2020 年诺贝尔化学奖。该基因组编辑工具来自对一种名为化脓性链球菌的人类病原体 CRISPR-Cas9 系统的研究。
4 个月大男孩腹股沟肿块
一名既往健康的 4 个月大男孩，没有免疫缺陷病史，因右侧腹股沟肿块 1 个月来就诊（图 1）。他是双胞胎，胎龄 37 周出生，母亲是健康的加拿大裔，当时居住在越南。3 个月大时，患者在多伦多就诊时出现右侧腹股沟肿块（1.6 × 1.4 厘米），但全身健康。头孢氨苄和克林霉素治疗对肿块无反应，并开始流出脓性分泌物。出生时，患者右臀部接种了卡介苗 (BCG) 疫苗（根据母亲的要求），并且出现疤痕（图 2）。超声检查显示淋巴结坏死。我们的鉴别诊断包括腹股沟疝、细菌性淋巴结炎、分枝杆菌淋巴结炎（由结核分枝杆菌或非结核分枝杆菌引起）或 BCG 脓肿。病变切除活检涂片呈抗酸杆菌阳性，聚合酶链反应呈结核分枝杆菌复合体阳性，培养呈牛分枝杆菌 BCG 生长。患者未接受其他治疗，术后伤口愈合良好。中南美洲、非洲、亚洲和东欧地区出生时均接种 BCG 疫苗。BCG 免疫接种的常见并发症包括局部反应和区域性淋巴结炎，多达 5% 的接种儿童会出现这些并发症，通常在免疫接种后 2-3 个月发生。 1 BCG 最常见的注射部位是三角肌区域，大多数 BCG 相关淋巴结炎（通常为化脓性）涉及腋窝淋巴结或锁骨上淋巴结。腹股沟淋巴结肿大的报道很少，其中 1 例与大腿免疫接种有关。2
SMOOT 文库和噬菌体诱导的 Cas9 定向进化可减少脱靶活性
RNA 引导的核酸内切酶（如 Cas9）可在细胞中提供有效的靶向基因组编辑，但也可能切割整个基因组中的脱靶位点。化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 的工程变体已被开发出来以全面降低脱靶活性，但个别脱靶可能仍然存在，或者靶向活性可能受到损害。为了在保持强大的靶向编辑的同时对抗特定脱靶的活性，我们开发了一种新颖的 M13 噬菌体介导选择方法。使用这种方法，连续几轮正向和负向选择用于识别增强或减弱特定基因组序列编辑活性的 Cas9 突变。我们还引入了寡核苷酸定向靶标扫描诱变 (SMOOT)，这是一种全面的诱变方法，用于创建高度多样化的 Cas9 变体库，这些库可以通过基于噬菌体的选择进行挑战。我们的平台识别出新的 SpCas9 突变体，这些突变体在生化测定和 T 细胞中减轻了对脱靶的切割，同时保持了比以前描述的变体更高的靶向活性。我们描述了一种进化的变体，S . pyogenes Adapted to Reduce Target Ambiguity Cas9 (SpartaCas)，它由最丰富的突变组成，每个突变的功能未知。这种进化的 Cas9 突变体减少了脱靶切割，同时保留了对多个治疗相关靶标的有效编辑。使用我们的系统对 Cas9 进行定向进化展示了一种改进的结构独立方法，可以有效地设计核酸酶活性。
革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌
根据我们作为颌面和口腔外科医生的医学实践，颈椎淋巴结的作物感染的手术患者数量不多。另一方面，脓性感染的存在不仅需要脓液的手术疏散，还需要抗菌药物的应用。这需要对疾病的细菌病毒剂的光谱进行充分了解，其确定和分析是本文的目的。在181例平均年龄为26.25岁的患者中研究的细菌在八年的时间内经过了回顾性的分析，范围为29天至82年，接受了化脓性宫颈淋巴结的手术。在其中69个中没有发现细菌。在83个（74.11％）的剩余112名患者中，孤立的微生物具有革兰氏阳性谱 - 金黄色葡萄球菌（n = 34），革兰氏阳性的菌群，由多种细菌（N = 21），葡萄球菌coccus（N = 10）（N = 10）（N = 10）（N = 10），均超过一个细菌（N = 21） （n = 9）和β-溶血性链球菌（n = 9）。革兰氏阴性细菌为25.89％（n = 29）-Klebsiella肺炎（n = 8），Bartonella henselae（n = 7），klebsiella oxytoca（klebsiella oxytoca（n = 6），肠杆菌（N = 5）（N = 5）和Flavimonas oryzihabitans（N = 3）。没有分离出厌氧和真菌微生物。因此，这些患者的抗菌治疗应针对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，在我们的研究中以大约三比一的比例表示，有利于革兰氏阳性微生物。否则，我们创造了在脖子上形成鹅卵的先决条件，这掩盖了患者生命的真正机会。
最初发表于：Schön，Viola；丹尼尔（Daniel）的Stocker； Jüngst，Christoph；莱因哈德（Reinhard）的假人； Ramelyte，Egle（2023）。免疫相关的硬化性cholangi
摘要：免疫检查点抑制剂已改善了许多癌症的治疗方法。但是，免疫相关（IR）不良事件可能会限制其使用。罕见但潜在的IR不良事件是IR-胆管炎，主要是由反编程细胞死亡1（PD1）抗体诱导的，通常是耐皮质类固醇。因此，增加了免疫疗法的疗法，这会干扰抗肿瘤反应并承受感染的风险。我们报告了2例BRAF V600E突变黑色素瘤患者，他们在三胞胎治疗下与Atezolizumab [抗 - 程序性细胞死亡配体1（PD-L1）抗体]，Vemurafenib（BRAF抑制剂）和cobimetinib（Mek Mek Inbibitor）一起出现了IR骨状胆管炎。在这两种情况下，皮质类固醇的给药最初都会导致边缘改善，但随后是胆汁酶的反弹，随后出现了伴有细菌血症的化脓性肝脓肿。肝脓肿在没有先前的侵入性手术的情况下开发，这意味着应考虑采用更严格的IR抑制性疗法治疗IR-胆管炎的方法。就我们的知识，我们报告了第一个2例IR-胆管炎病例和随后的肝脓肿，而没有先前的浸润性干预，这是三胞胎治疗引起的第一个IR-胆管炎病例，其中2例抗PD-L1中有2例在抗PD-L1诱发的病例中，有助于抗PD1和抗抗PD1和抗抗抗血症抗血脂症。需要改善IR-胆管炎的治疗策略，以防止威胁生命的感染并发症。
利用“全内”技术在肝细胞中进行离体/体内基因编辑...
肝脏是细胞和基因治疗以及基因编辑的首选器官，因为遗传性疾病众多且常常危及生命。已证明酪氨酸血症小鼠作为模型生物的 HDR 可以纠正该疾病，尽管不诱导 DSB 的同源重组效率非常低（Paulk 等人，2010 年；Junge 等人，2018 年）。在类似的小鼠模型中，通过流体动力学 DNA 注射（Yin 等人，2014 年）和非病毒 Cas9 mRNA 与腺相关病毒 (AAV) 载体介导的 HDR 模板递送相结合（Yin 等人，2016 年）证明了 CRISPR/Cas9 介导的表型拯救。AAV 载体已成为肝脏的基因递送载体，据报道在人体临床试验中具有令人印象深刻的治疗效果（Nathwani 等人，2014 年）。最近，在一个载体上编码化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 表达盒，在另一个载体上编码引导 RNA (gRNA) 和修复模板的双 AAV 载体系统的应用，逆转了新生小鼠鸟氨酸转氨甲酰酶基因的突变 ( Yang et al., 2016 )。这种体内基因编辑工具在两个载体上的分段归因于 AAV 的拟议包装尺寸限制，即 4.9 kb ( Grieger and Samulski, 2005 ) 至 5 kb ( Wu et al., 2010 )。两种不同的 AAV 载体共同递送是可行的，每种载体编码所需成分的一部分，这些成分在细胞内通过转剪、同源重组或内含肽重新结合（ Truong 等人， 2015 ），但在体内发生率较低（ Xu 等人， 2004 ）。
利用链球菌进行体内多重基因靶向...
胰腺导管腺癌是一种致命的癌症类型，与体细胞中的多种基因突变有关。基因工程小鼠几乎不适用于开发胰腺癌模型，异种移植模型在反映早期胰腺癌方面存在局限性。因此，使用成簇的规律间隔的短回文重复序列进行体内体细胞基因工程用于生成胰腺癌动物模型越来越受到关注。在本研究中，我们选择了 Kras、Trp53、Ink4a、Smad4 和 Brca2 作为靶基因，并应用空肠弯曲菌 Cas9 (CjCas9) 和化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 通过腺相关病毒 (AAV) 转导来开发胰腺癌。在确认 AAV2 的多灶性和弥漫性转导后，我们生成了 SpCas9 过表达小鼠，该小鼠在两次 AAV 转导后表现出靶基因中高双链 DNA 断裂 (DSB) 和胰腺上皮内瘤变 (PanIN) 病变；然而，三次 AAV 转导的野生型 (WT) 小鼠没有出现 PanIN。此外，将小型 Cjcas9 应用于具有两个 AAV 系统的 WT 小鼠，该小鼠还出现了高广泛性 DSB 和 PanIN 病变。观察到了导管和胰岛细胞中的组织学变化和癌症标志物（如 Ki67、细胞角蛋白、Mucin5a、α 平滑肌肌动蛋白）的表达。此外，研究还揭示了几个发现，例如 1) AAV-CjCas9 的多重 DSB 潜力、2) 导管周围淋巴细胞浸润、3) 多灶性癌症标志物表达，以及 4) 在 AAV 介导的靶向中启动 PanIN 需要 12 个月以上。在这项研究中，我们提出了一种用于体内癌症建模的有用工具，该工具也适用于其他疾病模型。
印度血清研究所私人有限公司 MenAfriVac 5 微克...
产品特性总结 1 药品名称 MenAfriVac 脑膜炎球菌 A 结合疫苗（冻干） 5 mcg 2 定性和定量组成 [脑膜炎球菌 A 多糖与破伤风类毒素载体蛋白结合] 每剂量 0.5 mL 含： 脑膜炎球菌 A 多糖 5 mcg 破伤风类毒素（载体蛋白）5 至 16.5 mcg 用稀释剂重构脑膜炎球菌 A 结合疫苗 剂量：0.5 mL 肌肉注射 有关辅料的完整列表，请参见第 6.1 节。稀释剂：每支安瓿含有稀释剂，佐剂为磷酸铝 (Al +++ )（每人单剂量 Al +++ 的含量不超过 1.25 毫克），防腐剂为硫柳汞 (0.01%)。稀释剂为白色略微不透明的均匀悬浮液，装于 5 毫升安瓿中。 3 剂型 注射剂，注射用粉剂 4 临床特点 4.1 治疗适应症 3 至 24 个月大的幼儿主动免疫，以预防 A 组脑膜炎奈瑟球菌引起的侵袭性脑膜炎球菌病。它不能预防其他形式的侵袭性疾病，包括由其他脑膜炎球菌群（如 B、C、W135、Y、X 组）、b 型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等引起的化脓性脑膜炎。它也不能预防由其他生物（如病毒、真菌、分枝杆菌等）引起的脑膜炎。4.2 剂量和给药方法对于 3 至 9 个月大的儿童，MenAfriVac 5 mcg 应分 2 剂给药，间隔至少 3 个月。9 至 24 个月大的儿童只需接种一剂。该疫苗仅供肌肉注射。MenAfriVac 5 mcg（脑膜炎球菌 A 结合疫苗 5 微克）应通过深部肌肉注射给药，最好注射到三角肌或大腿前外侧。疫苗不得皮下或静脉注射，不得与其他疫苗混合在同一注射器中。若同时注射，应使用不同的注射部位。
利用 CRISPR 干扰技术高效、快速地灭活核梭杆菌的基因
摘要 通过在具核梭杆菌中创建框内缺失突变来使基因失活非常耗时，并且大多数具核梭杆菌菌株在遗传上是难以处理的。为了解决这些问题，我们引入了一种基于核糖开关的可诱导 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 系统。该系统采用核酸酶失活的化脓性链球菌 Cas9 蛋白 (dCas9)，通过持续表达的单向导 RNA (sgRNA) 特异性地引导至目的基因。从机制上讲，这种 dCas9-sgRNA 复合物成为 RNA 聚合酶难以逾越的障碍，从而抑制了目标基因的转录。利用这个系统，我们首先研究了两个非必需基因 ftsX 和 radD，它们对于具核梭杆菌的胞质分裂和共聚集至关重要。添加诱导剂茶碱后，ftsX 抑制导致类似于染色体 ftsX 缺失的丝状细胞形成，而靶向 radD 则显著降低 RadD 蛋白水平，消除 RadD 介导的共聚集。随后将该系统扩展到探测必需基因 bamA 和 ftsZ，这两个基因对于外膜生物合成和细胞分裂至关重要。令人印象深刻的是，bamA 抑制破坏了膜完整性和细菌分离，阻碍了生长，而 ftsZ 靶向会在肉汤中产生细长的细胞，并且琼脂生长受到损害。对 F. nucleatum 临床菌株 CTI-2 和 Fusobacterium periodonticum 的进一步研究表明，靶向 tnaA 时吲哚合成减少。此外，沉默 F. periodonticum 中的 clpB 会降低 ClpB，从而增加热敏感性。总之，我们的 CRISPRi 系统简化了各种梭杆菌菌株的基因失活。
侵袭性 Y 血清群脑膜炎球菌病增加......
摘要 美国疾病控制与预防中心 (CDC) 发布此健康警报网络 (HAN) 健康咨询，以提醒医疗保健提供者注意侵袭性脑膜炎球菌病的增加，主要归因于脑膜炎奈瑟菌血清群 Y（图）。 2023 年，美国报告了 422 例病例，这是自 2014 年以来报告的年度病例数最高的一年。截至 2024 年 3 月 25 日，本日历年已向 CDC 报告了 143 例病例，比 2023 年截至该日期报告的 81 例增加了 62 例。2023 年，美国报告的大多数（148 例中的 101 例，68%）具有可用序列类型数据的 Y 血清群病例是由一种特定的脑膜炎球菌菌株（序列类型 (ST) 1466）引起的。由这种菌株引起的病例主要发生在 30-60 岁人群（65%）、黑人或非裔美国人（63%）和 HIV 感染者（15%）中。此外，2023 年 ST-1466 引起的侵袭性脑膜炎球菌病的大多数病例都有脑膜炎以外的临床表现：64% 表现为菌血症，至少 4% 表现为化脓性关节炎。在 94 名已知结果的患者中，有 17 人 (18%) 死亡；这一病死率高于 2017-2021 年报告的 Y 血清群病例的历史病死率 11%。医疗保健提供者应 1) 高度怀疑脑膜炎球菌病，特别是在受当前增长影响较大的人群中，2) 意识到患者可能没有脑膜炎的典型症状，3) 确保所有建议接种脑膜炎球菌疫苗的人，包括 HIV 感染者，都及时接种了脑膜炎球菌疫苗。