【产品简介】 本产品是从高度耐热菌 Thermus aquaticus 中克隆其 DNA 聚合酶基因,原核表达后经柱层析纯化获得的超纯、高效、耐热 DNA 聚合 酶, SDS-PAGE 显示为一条 94kD 的蛋白条带。该酶除具有 5 ' -3 ' DNA 聚合活性外,还具有少量的 5 ' -3 ' DNA 外切活性,但不 具有 3 ' -5 ' DNA 外切活性(校读活性),适用于常规 PCR 扩增。 M5 HiPer plus Taq DNA Polymerase 扩增得到的 PCR 产物含有 3'-A 碱基,可直接用于 TA 克隆 ( 聚合美 TOPO-TA 克隆载体货号: MF019 或 MF020) 。
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2024年2月22日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.02.21.581282 doi:biorxiv Preprint
TAQ DNA聚合酶是一种重组94 kDa DNA聚合酶,该聚合酶在带有克隆的Thermu Aquaticus DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中表达。它具有5'-3'聚合酶和外切核酸酶活性,并且没有可检测到的3'-5'外切核酸酶活性。TAQ DNA聚合酶的延伸速率为1-2 kb/ min。此外,它具有3'腺苷酸化活性。因此,PCR产品可直接用于TA-CLONing程序。
Sanger 测序或链终止或双脱氧方法基于 DNA 聚合酶的两个特性:聚合酶合成单链 DNA 模板的精确正确的互补拷贝,并且它们可以使用 2',3'- 双脱氧核苷酸三磷酸 (ddNTP) 作为底物。双脱氧核苷酸的 3' 端缺少羟基并且只有氢,因此一旦该核苷酸在生长点被掺入链中,链的延长就会停止在 ddNTP 处并且不再充当链延长的底物。在实践中,使用 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段,因为它不具有 5'- 3' 外切酶活性,这是完整酶的特性。所有 DNA 合成都需要引物,因此化学合成的寡核苷酸被用作引物,该引物退火到靠近需要测序的序列的位置。 (克列诺片段是大肠杆菌的DNA聚合酶I被蛋白酶枯草杆菌蛋白酶酶切时产生的一个大的蛋白质片段,它保留了5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,用于去除预编码核苷酸并进行校对,但失去了5'→3'外切酶活性,即引物去除活性)。
polg:P140,POL G,聚合酶和外切核酸酶的催化亚基POLG2:p55,POL G的附件亚基作为加工性因子TWNK:复制DNA Helicase SSBP1:单链DNA DNA结合蛋白
腺病毒5 WA蛋白复合物是从病毒体中分离出来的,作为双链wra分子,由每条链的5'末端共同连接到Imknawn功能的Virion蛋白上。可以用大肠杆菌异核酸酶III消化WA-蛋白质复合物,以产生类似于WA复制中间体的NOLECULES,因为它们包含长长的单个绞线区域,以5'tenmini结合到最高的蛋白质。非核酸酶III消化大大降低了原酶消化腺病毒5 WNA的感染性。hawever,当至少2400个核苷酸被重重载时,KA蛋白复合物的感染性不会显着改变。这表明末端蛋白可以通过细胞外切核酸酶保护5'终止的单链fran消化。DNA-蛋白质复型从宿主范围突变体制备,其左4%的突变映射与外切核酸外切酶III消化,与野生型限制性片段杂交,将左8%的GENANE片段与HELA细胞旋转。具有野生型表型的病毒以高频回收。
TAQ DNA聚合酶是一种衍生自含水型菌群的重组DNA聚合物的DNA。其分子量为94 kDa。TAQ DNA聚合酶可以将靶DNA扩大到5KB(简单模具)。扩展速度为0.9〜1.2kb/min(70〜75 o C)。它具有5'至3'的活性,没有3'活性到5'外切酶,而没有导致含有3'-da末端的PCR产物。
收稿日期:2024年4月8日。酶是由微生物利用植物材料作为底物产生的生物催化剂。绿色化学利用植物材料生产酶,而发酵技术则可以更大规模地生产酶。这些酶可用于食品、纺织、造纸工业和生物燃料生产。纤维素酶是一种工业酶,可以断裂植物细胞中多糖的β-1,4-糖苷键,可以由各种微生物产生。芒果废料可用于在深层发酵(SmF)中利用微生物生产生物活性化合物,例如纤维素酶。采用单因素试验和响应面法,对施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)以芒果皮为底物在SmF中生产内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶进行了优化。 CMCase的最适条件为底物浓度4.5%、培养96 h、接种量2.5%;FPase的最适条件为底物浓度4.5%、培养48 h、接种量0.5%。利用PBD对K 2 HPO 4 、KH 2 PO 4 、(NH 4 ) 2 SO 4 、NaCl、MgSO 4 、FeSO 4 、CaCl 2 等营养组分进行筛选,发现最显著的营养参数为FeSO 4 、MgSO 4 、(NH 4 ) 2 SO 4 。通过中心复合设计,发现在0.1%(NH4)2SO4、0.1%MgSO4和0.45%FeSO4条件下,内切葡聚糖酶产量最大,为120.112IU/mL/min;在0.1%(NH4)2SO4、0.5%MgSO4和0.05%FeSO4条件下,外切葡聚糖酶产量最大,为161.38IU/mL/min。CMCase和FPase最大活性的最适温度和pH分别为50℃和7.0。内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶在高达 50 °C 和 pH 7 的温度下均保持稳定。金属离子(例如 Mn 2+ 和 Cu 2+)分别激活 CMCase 和 FPase 的活性,而 Zn 2+ 和 Na + 则分别抑制 CMCase 和 FPase 的活性。关键词:施氏假单胞菌、纤维素酶、深层发酵、木质纤维素生物质引言
narta K,Srivastav R,Ray AK,Malik G,Vats A,Motiani RK,Thukral L,Roy SS,Bhattacharya S,Sharma R,Natarajan K,Mukerji M,Pandey R,Pandey R,Pandey R,Gokhale RS,Gokhale RS,Natarajan VT(2019)。myg1外切酶通过RNA处理融合了核和线粒体翻译程序。核酸res。47,11:5852–5866。(I.F 14.9)
无缝克隆方法 [ 1 ] 是传统限制性位点克隆的绝佳替代方案,其优势在于只需单管反应,即可在短短 30 分钟内无缝组装多个片段(图 1)。此方法包括 Gibson Assembly 和 Golden Gate,可实现定向克隆,无需特定的限制序列。无缝克隆依赖于使用由嗜温外切酶、嗜热连接酶和高保真聚合酶组成的酶混合物。由于组装需要两端都有完整的序列,因此该方法可以筛选出截短的序列或末端有错误的序列。我们建议在组装和大多数克隆应用中使用无缝克隆方法。