Application key: E- ELISA, WB- Western blot, IH- Immunohistochemistry, IF- Immunofluorescence, FC- Flow cytometry, IC- Immunocytochemistry, IP- Immunoprecipitation, ChIP- Chromatin Immunoprecipitation, EMSA- Electrophoretic Mobility Shift Assay, BL- Blocking, SE- Sandwich ELISA, CBE- Cell-based ELISA,RNAi-RNA干扰物种反应性关键:H-人,M-小鼠,r-大鼠,B-牛,C-鸡,d-Dog,G-Goat,G-Goat,Mk-Monkey,P-Pig,P- Pig,rb-Rabbit,S羊,Z- Zebrafish,Zebrafish
摘要:Castanea sativa是全球重要的树坚果物种,以其多功能作用,尤其是木材和坚果生产而受到高度赞赏。如今,需要采取新的策略来实现对疾病,气候变化,更高产量和营养质量的植物弹性。 在新的植物育种技术(NPBT)中,CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。 此外,CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白(RNP)的形式传递到细胞中,从而避免通过原生质体技术避免外源DNA(无GMO-FRO)整合,这代表了基因编辑的有趣材料,这要归功于高度渗透性的DNA膜。 在本研究中,我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。 针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1%纤维素酶Onozuka R-10和0.5%MacRozyme R-10。 在黑暗条件下在25℃孵育4小时后,获得了4,500,000个原生质体/mL的产率(可行的91%)。 使用GFP标记基因评估转染能力,转染原生质体的百分比为51%,在转染事件后72小时。 然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。 结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。如今,需要采取新的策略来实现对疾病,气候变化,更高产量和营养质量的植物弹性。在新的植物育种技术(NPBT)中,CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。此外,CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白(RNP)的形式传递到细胞中,从而避免通过原生质体技术避免外源DNA(无GMO-FRO)整合,这代表了基因编辑的有趣材料,这要归功于高度渗透性的DNA膜。在本研究中,我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1%纤维素酶Onozuka R-10和0.5%MacRozyme R-10。在黑暗条件下在25℃孵育4小时后,获得了4,500,000个原生质体/mL的产率(可行的91%)。使用GFP标记基因评估转染能力,转染原生质体的百分比为51%,在转染事件后72小时。然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2023年3月31日发布。 https://doi.org/10.1101/2023.03.03.31.535108 doi:Biorxiv Preprint
摘要:帕金森氏病是全球第二常见的神经退行性疾病,其特征是蛋白质沉积物在多巴胺能神经元中的积累。这些沉积物主要由α -syn uclein(α -syn)的聚集形式组成。尽管对这种疾病进行了广泛的研究,但目前只有症状治疗。近年来,已经鉴定出了几种化合物,主要是芳香特征,靶向α -syn自组装和淀粉样蛋白形成。这些化合物是通过不同方法发现的,具有化学多样性,并且表现出了许多作用机制。这项工作旨在提供与帕金森氏病有关的生理病理学和分子方面的历史概述,以及小型复合发育中的当前趋势,以靶向α -Syn聚集。尽管这些分子仍在开发中,但它们构成了发现帕金森氏病有效的抗缔解疗法的重要一步。
白内障是全球失明的主要原因。先天性或小儿白内障也可能导致永久性视力障碍或失明,即使尝试进行最佳尝试。很大一部分小儿白内障具有遗传原因。因此,识别导致白内障形成的基因对于理解遗传性小儿白内障的病理过程以及新疗法的发展至关重要。尽管基因组技术取得了明显进展,但对新鉴定的候选基因和变体的生物学效应的验证仍然具有挑战性。在这里,我们提供了一条逐步的管道,使用CRISPR-CAS9核糖核蛋白复合物(RNP)评估F0斑马鱼中的白内障候选基因。包括CRISPR-CAS9 RNP设计和配方的详细片段,微注射,CRISPR-CAS9 RNP RNP剂量和交付途径的优化,编辑功效分析以及白内障形成评估。遵循此协议,可以在2周内使用基本实验室供应在2周内轻松评估任何白内障候选者。
通缉! 名称 α-突触核蛋白,别名:NACP、PARK1/PARK4 地址 染色体 4q22.1 身高/体重 140 个氨基酸,14 kDa 蛋白质 外观 单体,四聚体 α -螺旋寡聚体,与生物膜相关 犯罪聚集体可导致帕金森氏症
有关新一代临床评分系统、实验室参数和成像方法的文献。[4,5,7-11] 预测和预后因素在 AIS 中起着至关重要的作用,为疾病的潜在发展提供了宝贵的见解,并有助于治疗决策。确定可靠的预后指标可使医疗保健专业人员根据个体患者特征量身定制干预措施,优化治疗策略和资源分配。研究人员积极寻求发现新的预测和预后生物标志物,以增强我们对疾病轨迹的理解并改善患者的治疗结果。该领域的进展不仅有助于完善预后模型,还有助于开发靶向疗法,最终为更个性化和更有效的 AIS 管理铺平道路。[1,7-10]
Ilham Y. Abdi 1.2†,Indulekha P. Sudhakaran 17,18,Vasilies 3.4,Elisabeth Kapaki 3.4,George Houlden 16,Laura Parkkinen 10,Wilma D.J.去Berg 11,Michael G.agnaf 1.2 *
缩写:未检测到的SAA-,α -syn播种聚集体; SAA +,α-突触核蛋白聚集物用与PD和DLB中看到的特征播种一致的聚集谱检测到。考虑年龄,性别和APOEε4状态的差异后,组差异意义。未经调整的结果。b组差异在考虑年龄,性别,apoEε4状态和CSFAβ42水平的差异后的差异。未经调整的结果。
摘要:帕金森病 (PD) 是一种常见的运动障碍,估计到 80 岁为止,有 4% 的人会患有此病。葡萄糖脑苷脂酶 1 (GBA1) 基因突变是 PD 最常见的遗传风险因素,至少 7-10% 的非德系 PD 个体携带 GBA1 突变 (PD-GBA1)。尽管与特发性 PD 相似,但 PD-GBA1 的临床表现包括发病年龄略低、神经精神症状发生率更高,并且认知障碍往往更早、更普遍且更严重。PD-GBA1 的病理生理机制尚不完全清楚,但与特发性 PD 一样,α-突触核蛋白积累被认为起着关键作用。有人假设这种 α-突触核蛋白的过度表达是由表观遗传修饰引起的。在本文中,我们分析了特发性 PD、PD- GBA1 和老年非 PD 对照者三个不同脑区(额叶皮质、壳核和黑质)中内含子 1 和 α -突触核蛋白 ( SNCA ) 基因启动子内的 17 个 CpG 位点的 DNA 甲基化水平。在这三个脑区中,我们发现特发性 PD 和 PD- GBA1 的内含子 1 的 8 个 CpG 区域内的 DNA 甲基化呈下降趋势。DNA 甲基化降低的趋势在 PD- GBA1 中更为明显,额叶皮质的下降更为显著。这表明 PD- GBA1 和特发性 PD 具有不同的表观遗传特征,并强调了区分特发性 PD 和 PD- GBA1 病例的重要性。这项工作还提供了初步证据,表明 PD 中可能存在不同的遗传亚型,每种亚型都有其自身的病理机制。这可能对 PD 的诊断和治疗方式具有重要意义。