溶解缓冲液MB1 2 ml 25 ml裂解缓冲液MB2 2 ml 30 ml W1缓冲液(浓缩物)* 1.3 ml 22 ml洗涤缓冲液(浓缩液)** 1 ml 15 ml 15 ml洗脱缓冲1 ml 8 ml 8 ml溶菌酶lysozyme lysozyme lysozyme▀3mg 36 mg 36 mg蛋白酶k(液体)contrion limits 100 µl = 4 ll×2 1050 µpt con管4 PCS 50 PCS用户手册1 1
NucleOmag®HMWDNA试剂盒设计用于从细胞,组织和植物材料中分离出高分子量DNA。此外,还显示了全血(EDTA),唾液,颊拭子以及细菌和酵母样品的兼容性。该程序基于在适当的缓冲液条件下核酸对顺磁珠的可逆吸附。样品裂解是使用裂解缓冲液HM1或HMB和蛋白酶K进行酶促的。用于将核酸与顺磁珠,结合缓冲液HM2和核瘤®B-珠的结合添加到转移和清除的裂解物中。磁分离后,使用洗涤缓冲液HM3,HM4和70%乙醇洗涤顺磁珠以去除污染物和盐分。使用冲洗缓冲液HM5去除以前的洗涤步骤的残留乙醇。接下来,高度纯化的DNA用洗脱缓冲液HM6洗脱,可直接用于下游应用。可以手动使用NucleOmag®HMWDNA试剂盒,也可以在标准的液体处理仪器和自动磁分离器上自动化。
NucleOmag®HMWDNA试剂盒设计用于从细胞,组织和植物材料中分离出高分子量DNA。此外,还显示了全血(EDTA),唾液,颊拭子以及细菌和酵母样品的兼容性。该程序基于在适当的缓冲液条件下核酸对顺磁珠的可逆吸附。样品裂解是使用裂解缓冲液HM1或HMB和蛋白酶K进行酶促的。用于将核酸与顺磁珠,结合缓冲液HM2和核瘤®B-珠的结合添加到转移和清除的裂解物中。磁分离后,使用洗涤缓冲液HM3,HM4和70%乙醇洗涤顺磁珠以去除污染物和盐分。使用冲洗缓冲液HM5去除以前的洗涤步骤的残留乙醇。接下来,高度纯化的DNA用洗脱缓冲液HM6洗脱,可直接用于下游应用。可以手动使用NucleOmag®HMWDNA试剂盒,也可以在标准的液体处理仪器和自动磁分离器上自动化。
开始之前要做的事情■将样品平衡到室温(15–25°C)。■将水浴或加热块加热到56°C以供步骤4使用。■在步骤11中平衡缓冲液或蒸馏水到室温。■确保根据第16页的说明准备了缓冲液AW1,Buffer AW2和Qiagen蛋白酶。■如果在缓冲液中形成沉淀物,请在56°C下孵育。
7。将磁铁与管接触,直到所有Sbeadex颗粒形成一个沉淀(通常取决于样品类型)。在继续步骤8之前,请确保将所有Sbeadex颗粒均匀。8。卸下上清液并丢弃。确保去除尽可能多的上清液,并注意不要脱离颗粒。9。将适当的洗脱缓冲液放大器和涡流添加60秒。或者,涡旋30秒,在60°C下孵育1-5分钟。洗脱缓冲液AMP体积应为步骤1中使用的裂解物体积(例如如果使用了200 µL裂解液,请添加100 µL洗脱缓冲液AMP)。为了获得较高的浓缩DNA,可以将洗脱缓冲液体积减小到20 µL。
1。样品制备 - 将20 µL纯化的DNA与130 µL闪电转换试剂混合。样品然后在热循环器上进行转换反应。建议这些步骤手动执行 - 甲板。2。仪器设置 - 试剂被装入槽中,并将实验室放在液体处理程序仪器上。翠鸟™Flex用户将手动将所有试剂装入深井板中。3。样品转移 - 步骤1的样品板被加载到液体处理程序仪器上,将其转移到包含600 µL M结合缓冲液和10 µL EZ EZ-EZ-甲基化的Magprep珠子的结合板中。翠鸟™Flex用户将在加载仪器之前手动将样品转移到装订板中。自动化脚本从这里开始。4。ez-甲基化的magprep珠子结合和缓冲液的去除 - 包含样品的深井板进行混合5分钟,而DNA与珠子结合。然后使用磁铁将珠子聚合4分钟,然后去除/分离结合缓冲液。5。m洗涤1 - 400 µL M洗涤缓冲液,并将深井板混合1-2分钟。然后使用磁铁将珠子聚合2分钟,然后去除/分离洗涤缓冲液。6。l-脱硫化孵育 - 添加200 µL L-脱硫化缓冲液并允许孵育15分钟。然后使用磁铁将珠子聚合2分钟,然后去除/分离脱硫化缓冲液。7。8。9。m洗涤2和3 - 步骤5重复两次以彻底洗涤珠子。残留洗涤缓冲液仔细去除以改善干燥。翠鸟™Flex用户可以在这里停止并手动执行剩余的步骤,以确保最小的收益率损失。珠干 - 将珠子在55°C下干燥20-30分钟或在室温下持续30分钟。洗脱 - 将25 µL的M液压缓冲液添加到珠子中并混合5分钟。然后使用磁铁将珠子聚合2分钟,然后将洗脱器转移到新的96孔微板板中。脚本在这里结束。
将色谱柱放入干净的微量离心管中。将30-50µL洗脱缓冲液,TE缓冲液或无菌水直接加到柱膜上,并站立2分钟。对于大于8KB的DNA片段,在65°C -70°C下使用预热的洗脱缓冲液,以提高洗脱效率。在10,000 x g处离心1分钟以洗脱DNA。将DNA存储在4°C或-20°C下。对于较高的产率,在50µL中洗脱DNA,为更高的浓度,以较小体积的DNA(即:30µL)洗脱DNA。但是,产量将略有降低。确保洗脱缓冲液直接分配到膜的中心,以完全洗脱。te缓冲液也可以洗脱DNA。如果用水用于洗脱DNA,则最大洗脱效率在PH7.0和8.5之间。将DNA存储在-20°C时,DNA可能在没有缓冲剂的情况下会降解。