XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search System连接酶
基于 CUL4B 的 E3 泛素连接酶通过募集磷酸化特异性 DCAF 来调节有丝分裂和大脑发育
旁系同源物 CUL 4 A 和 CUL 4 B 组装 cullin-RING E 3 泛素连接酶 (CRL) 复合物，调节多种染色质相关的细胞功能。尽管它们结构相似，但我们发现 CUL 4 B 独特的 N 端延伸在有丝分裂期间被大量磷酸化，而磷酸化模式在导致 X 连锁智力残疾 (XLID) 的 CUL 4 BP 50 L 突变中受到干扰。表型表征和突变分析表明，CUL 4 B 磷酸化是有效进行有丝分裂、控制纺锤体定位和皮质张力所必需的。虽然 CUL 4 B 磷酸化触发染色质排斥，但它促进与肌动蛋白调节剂和两个以前未被认识的 CUL 4 B 特异性底物受体 (DCAF) LIS 1 和 WDR 1 的结合。事实上，共免疫沉淀实验和生化分析表明 LIS 1 和 WDR 1 与 DDB 1 相互作用，并且 CUL 4 B 的磷酸化 N 端结构域增强了它们的结合。最后，人类前脑类器官模型表明 CUL 4 B 是形成与前脑分化开始相关的稳定脑室结构所必需的。总之，我们的研究发现了以前未被发现的与有丝分裂和大脑发育相关的 DCAF，它们通过磷酸化依赖机制特异性结合 CUL 4 B，但不结合 CUL 4 BP 50 L 患者突变体。
无甘油T4 DNA连接酶（HC） 产品处理指南
储存和稳定性： 无甘油 T4 DNA 连接酶（ HC ）采用蓝冰运输。到货后储存于 -20°C 下，以获得最佳稳定性。应避免反 复冻融循环。 有效期： 在外包装盒标签上的有效期内，在推荐条件下储存并正确处理时，试剂盒可保持完整活性。 安全预防措施： 处理试剂前请阅读并理解 SDS （安全数据表）。首次发货时提供 SDS 的纸质版文件，此后可应要求提 供。 质控： Meridian 遵守 ISO 13485 质量管理体系运行。无甘油 T4 DNA 连接酶（ HC ）活性可使用 PCR 检测消化 后的 λDNA 的还原效率来测定。无甘油 T4 DNA 连接酶（ HC ）在放行前已经过纯度、核酸外切酶和核 酸内切酶污染测试。 注： 仅供科研和进一步生产使用。
一种评估E3连接酶用于靶向蛋白质降解
抽象评估靶蛋白降解（TPD）的潜在〜700 E3连接酶的适用性的主要挑战之一是缺乏针对每个E3连接酶的粘合剂。在这里，我们将遗传密码扩展（GCE）用于编码含四嗪的非典型氨基酸（TET-NCAA）位点特定于E3连接酶，可以通过在活着的细胞中与新的蛋白质蛋白质培养细胞一起将其连接到新的植物蛋白质蛋白培养细胞中。可以用Neo-Substrate的TPD评估所得的E3连接酶最小化和功能化的最小化和功能化。我们证明，用可单击的TET-NCAA编码的CRBN可以在已知的免疫调节药物（IMID）中或跨表面编码，可以共价连接到STCO-LINKER-JQ1和招募BRD2/4的crbn介导的降解，以表明CRBN的高塑料tpd。降解效率取决于在CRBN上编码的TET-NCAA的位置以及接头的长度，显示了这种方法在绘制E3连接酶表面识别最佳TPD口袋的能力。这种Elef-脱脂剂的方法不仅具有维持E3连接酶的天然状态，而且还允许在细胞内条件下对E3连接酶和靶蛋白伴侣进行询问，并且可以应用于任何已知的E3连接酶。关键字：泛素 - 蛋白酶体系统，靶向蛋白质降解，E3连接酶，Cereblon，遗传代码扩展，四嗪单击化学
DNA连接酶III/LIG3单克隆抗体
背景信息DNA连接酶III（DNA连接酶3）是一种酶，在人类中被LIG3基因编码。人类Lig3基因编码依赖ATP的DNA连接酶，该连接酶密封双链DNA的磷酸二酯主链中的中断。真核生物中有三个依赖ATP的DNA连接酶。这些酶利用相同的三步反应机制； 1形成共价酶 - 腺苷酸中间体； 2将腺苷酸基的转移到DNA柱的5'磷酸末端； 3磷酸酯键的形成。与几乎所有真核生物中发现的Lig1和Lig4家族成员不同，Lig3家族成员的分布较差。LIG3基因通过替代翻译起始和替代剪接机制编码几种不同的DNA连接酶。
HGIDGID4 E3泛素连接酶配合物靶标ARHGAP11A调节细胞迁移
人类CTLH/GID（HGID）复合物作为调节多个细胞过程的重要E3连接酶，包括细胞周期进程和代谢。但是，由HGID控制的生物学功能范围仍未开发。在这里，我们使用接近性依赖性生物素化（BioID2）来识别与HGID复合物相互作用的蛋白质，其中包括以口袋依赖性方式结合GID4的底物可以进行。生物化学和细胞分析表明，HGID GID4 E3连接酶结合并泛素化Arhgap11a，从而将此RhoGap靶向蛋白酶体降解。的确，GID4耗尽或阻碍使用PFI-7 In-Hibor的GID4底物结合袋稳定Arhgap11a蛋白质，尽管它没有功能性N末端DEGRON。有趣的是，GID4失活通过增加细胞外围的Arhgap11a水平而损害细胞运动，并导致细胞的运动，在该细胞周围会使RhoA失活。一起，我们确定了广泛的HGID GID4 E3连接酶亚曲线，并发现了通过靶向ARHGAP11A来调节细胞迁移的HGID GID4 E3连接酶的独特功能。
连接酶介导的可编程基因组整合（L-PGI）
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2024年9月29日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.09.27.615478 doi：Biorxiv Preprint
EL0012 T4 DNA连接酶DNAPAC RP列
常见的移动阶段LC/UV流动阶段A：100 mm TEAA流动阶段B：100 mm TEAA在水/乙腈中（75:25 v/v）LC/MS流动期HFIP：六氟异丙醇
扭曲工程T4 DNA连接酶
拥挤的药物可在提高速度和效率的可选努力中使用了粘性拥挤剂，例如聚乙烯甘油（PEG），以增加底物的局部浓度并推动反应前进。但是，这种拥挤的代理可能会增加变异性或对于自动分配系统而言很难使用。此外，在克隆反应中使用拥挤剂需要在转换之前进行纯化步骤，这增加了动手的时间和处理。我们研究了在0％，2.5％和5％PEG 8000的情况下，各个连接酶对CFDNA底物的疗效。我们引用了电文件图的痕迹以识别3个连续的峰：底物，底物 + 1个适配器和底物 + 2个双侧适配器。如图5所示，扭曲工程的T4 DNA连接酶可以将大部分底物转换为所需的双连接峰独立于拥挤剂输入。
Cullin环泛素连接酶在心脏发育中的新作用
摘要：心脏发育是一个时空调节的过程，从胚胎阶段延伸到产后阶段。这种高度精心策划的过程的破坏会导致先天性心脏病或使心脏疾病或心脏衰竭使心脏易受。因此，对控制心脏发育的分子机制有深入的了解，对开发各种心脏疾病的创新疗法具有很大的希望。尽管已经取得了心脏发育的新型转录和表观遗传调节剂的重大进展，但探索影响这一过程的翻译后机制却滞后。culling环E3泛素连接酶（CRLS）是最大的泛素连接酶家族，控制约20％的细胞内蛋白的泛素化和降解。新兴证据发现了CRL在调节广泛的细胞，生理和病理过程中的关键作用。在这篇综述中，我们总结了有关CRL对心脏形态发生和成熟的多功能调节的最新发现，并呈现未来的观点，以促进我们对CRLS如何管理心脏发育过程的全面理解。
N-Degron途径的二肽基肽酶和E3连接酶配合以调节蛋白质稳定性
n-脱绿素是位于蛋白质N末端的短序列，可介导E3连接酶（E3S）与底物的相互作用以促进其蛋白水解。可以很好地确定，可以在蛋白酶裂解后暴露于n-脱绿素，以允许E3识别。但是，我们关于蛋白质和E3如何在蛋白质质量控制机制中合作的知识仍然很少。使用系统的方法监测N末端组文库的蛋白质稳定性，我们发现第三n末端位置（以下简称“ P+3”）的脯氨酸残基会促进不稳定性。遗传扰动鉴定出二肽基肽酶DPP8和DPP9以及N-Degron途径的主要E3S，UBR蛋白，是P+3轴承底物的调节剂。有趣的是，P+3 UBR底物对分泌蛋白显着富集。我们发现，分泌蛋白依赖于信号肽（SP）的靶向蛋白包含其SP中的“内置” N-Degron。此Degron在易位失败到指定的隔室后被DPP8/9暴露，从而使UBR可以清除错误定位的蛋白质。