在使用 CRISPR/Cas9 或其变体进行基因重写时,使用一小段称为引导 RNA 的 RNA 来引导 CRISPR/Cas9(或其变体)到达基因组中想要重写的序列。研究小组首先尝试利用一个在网上公开、任何人都可以访问的程序(CRISPick)2)来筛选出一种有效的向导RNA,然后利用TPN方法重写基因。我们利用TPN法,对在培养的人体细胞中预先导入的特定基因的碱基置换进行修正,并用各种向导RNA测定了改写效率。结果发现,通过CRISPick程序筛选出的向导RNA如预期一样,实现了较高的改写效率。
Ministry of Health, Labour and Welfare Social Affairs Bureau, Business Division, War Dead Remains Appraisal Promotion Office *For families of Okinawan War deceased members who live in Okinawa Prefecture and are survivors, click here (email address) aa031704@pref.okinawa.lg.jp (fax address) 098-866-2758 (mail address) 1-2-2 Izumizaki, Naha City, Okinawa Prefecture 900-8570
This research is based on the Japan Science and Technology Agency (JST) Strategic Creative Research Promotion Project CREST "Esoterication of life phenomena caused by extracellular granules and the creation of basic technologies for controlling them (research general: Baba Yoshinobu, JPMJCR19H5), Mitsubishi Foundation's Special Grant for Natural Science Research, Academic Research Grant for COVID-19, JSPS's Grant for Scientific Research (JSPS) Academic Change Area Research (A) "Development of single-molecular measurement technology and device for unexplored proteins (Principal researcher: Watanabe Rikiya, 20H05931)," and the basic research (A) "Development of novel virus infection diagnosis methods based on digital detection technology (Principal researcher: Watanabe Rikiya, 21H04645)," and the Japan Agency for Medical Research and Development (该计划得到了各种机构的支持,包括用于促进新兴和振兴感染疾病的创新药物的研究项目(主要研究者:Watanabe Rikiya,JP22FK0108542),公共和私人研究人员发掘支持项目(主要研究人员:沃特纳贝Rikiya,JP2222 He)。 ----
参考文献Kishita Y,Shimura Y,Kohmura M,Akita M,Imai-Okazaki U,Iyatsuka Y,Nakajima Y,Ito T,Ito T,Ohtake,Ymamama K,Ymamama K,Okazaki Y MICOS13/QIL1中的一种新型纯合差异会导致线粒体DNA depletions综合征的hepato-Gegendephalopathy。 mol Genet Genomic Med 2020; 8(10):E1 doi:10.1002/mgg3.1427参考文献Kishita Y,Shimura Y,Kohmura M,Akita M,Imai-Okazaki U,Iyatsuka Y,Nakajima Y,Ito T,Ito T,Ohtake,Ymamama K,Ymamama K,Okazaki YMICOS13/QIL1中的一种新型纯合差异会导致线粒体DNA depletions综合征的hepato-Gegendephalopathy。mol Genet Genomic Med2020; 8(10):E1doi:10.1002/mgg3.1427
我们预测,只有在两种蛋白质结合时,就会存在一个独特的分子,并且从使用分裂 - 涡轮注释3进行的分析中,我们还发现,许多转录调节剂与该复合物结合起作用。从以上结果来看,已经揭示了BOD1L与setD1a结合,并且比作为DNA修复调节剂更有帮助癌症生长和生存的转录启动子。 ■研究人员的评论(Chiba University医学研究生院Hoshii副教授)我们很高兴能够解决蛋白质 - 蛋白质相互作用的奥秘,这些蛋白质相互作用已经很长时间了。 SETD1A本身也引起了人们的关注,作为儿童疾病和精神分裂症的原因,因此我们希望这一发现将有助于癌症以外的其他疾病的治疗。 ■词汇表注释1)CRISPR平铺方法:一种通过设计基因编辑技术CRISPR/CAS9中用于单个基因的无数SGRNA来全面检查和识别在蛋白质上具有功能的位置的方法。注2)DEPMAP数据库:一个数据库,旨在鼓励发现癌症治疗靶标和开发治疗方法,以1,000多个癌细胞系进行的大规模CRISPR-CAS9筛选的结果。注3)分裂 - 涡轮增压:一种接近依赖性的标记方法,允许识别其周围蛋白质的标记,仅限于两种蛋白质相互作用时。 ■Paper information Paper title: BOD1L mediates chromatin binding and non-canonical function of H3K4 methyltransferase SETD1A Author: Takayuki Hoshii*, Sota Kikuchi, Tomoya Kujirai, Takeshi Masuda, Tomoko Ito, Satoshi Yasuda, Makoto Matsumoto, Bahityar Rahmutulla, Masaki Fukuyo,Takeshi Murata,Hitoshi Kurumizaka,Atsushi Kaneda *负责作者杂志名称:核酸研究doi:10.1093/nar/gkae605■参考材料1纸张1个纸张标题:SetD1A的非静脉功能调节setd1a的非催化功能。 10.1016/j.cell.2018.01.032■参考材料2纸张标题:setD1a在白血病杂志中调节血红素生物合成基因的转录暂停释放杂志名称:细胞报告DOI:10.1016/j.cellep.2022.1111727
作者:Taichi Igarashi,Marianne Mazevet,Takaaki Yasuhara,Kiyoshi Yano,Akifumi Mochizuki,
图2 利用基因组编辑技术建立疾病模型的研究a:利用源自患有遗传性疾病患者的疾病特异性iPS细胞株,利用基因组编辑技术建立基因修复型iPS细胞株。通过比较两种菌株的受影响细胞类型,我们将分析病理并发现治疗药物。将来,还有望进行通过移植修复型iPS细胞系诱导分化的细胞的基因治疗(细胞治疗)。 b:利用基因组编辑技术将基因突变引入来自健康个体的iPS细胞系,以建立针对疾病的iPS细胞系。通过比较两种菌株的受影响细胞类型,我们将分析病理并发现治疗药物。