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摘要：发展可持续农业实践需要增加我们对植物 - 微生物相互作用的了解。为了研究这些相互作用，需要用于操纵非模式微生物的新遗传工具。为了满足这一需求，我们最近报告了不依赖底盘的重组酶辅助基因组工程 (CRAGE) 的开发。CRAGE 依赖于两对互斥的 lox 位点之间的盒式交换，并允许将大型复杂基因构建体直接、单步染色体整合到不同的细菌物种中。然后，我们通过引入第三个互斥的 lox 位点扩展了 CRAGE，创建了 CRAGE-Duet，它允许两个构建体的模块化整合。CRAGE-Duet 比 CRAGE 更具优势，尤其是在需要繁琐的重新克隆步骤来构建单整合构建体时。为了证明 CRAGE-Duet 的实用性，我们从促进植物生长的根瘤菌 Pseudomonas simiae WCS417r 中创建了一组菌株，这些菌株表达了各种荧光标记基因。我们在共聚焦显微镜下同时可视化了这些菌株，证明了 CRAGE-Duet 在创建生物系统以研究植物 - 微生物相互作用方面的实用性。关键词：细菌菌株工程、基因组工程、基因组编辑、CRAGE、Cre-lox 重组、荧光蛋白
CRAGE-Duet 促进生物系统的模块化组装，用于研究植物-微生物相互作用
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