合成了具有最高预测效力的构建体并在 HEK293T 细胞中进行了测试。第一代的结果表明,大多数增强子+启动子构建体的性能与母体 C6 启动子一样好或更好。特别是,构建体 C120 和 C124 分别表现出约 30% 和约 40% 的提高效力。同样,一些点突变导致性能提高 10% 到 30%。超突变构建体(采用迭代或贪婪方法)破坏了 HEK293T 细胞中的启动子活性。根据第一代的结果,我们合理地设计了一组新的构建体,这些构建体基于体外表达最高的构建体的组合。第二代在 HEK293T 细胞中进行了测试,所有构建体都表现出比亲本 C6 更高的表达。特别是,与原始 C6 构建体相比,构建体 C187 达到了约 2 倍的改善。