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使用三步方法评估了pH对DNA完整性的影响。该彗星测定在整个基因组水平上使用，具有三种不同的方案：中性（无碱性释放），Flash（pH 12.5，带有2.5分钟的放松）和常规的碱性方案（pH> 13具有40分钟的放松）。然后使用实时定量PCR（RT-QPCR）研究分离的DNA，表明基因扩增随pH值的增加而降低，表明DNA降解。专门设计的分子信标被用于检查分子水平的DNA，有或没有碱性位点（ALS）插入。在pH 12.5时，ALS发夹中的荧光在30分钟后开始增加，而在pH> 13时，在5分钟后已经观察到这种增加，表明DNA链断裂显着增加。还使用了液相色谱分析，恶魔表明，即使在1小时暴露1小时后，发夹仍保持完整直至pH 10，而在pH 12.5时，部分转化为链断裂，在30分钟后发生。在pH> 13时，发夹几乎在30分钟后几乎完全降解。闪存方案有效检测DNA单链断裂，并在pH 12.5时碱性处理2.5分钟后确定了这些损害。将发夹暴露于pH 12.5持续60分钟时，ALS转化为链断裂，证明了这种方法检测DNA结构变化的敏感性。这些发现表明，与更接近中性的条件相比，pH对DNA完整性构成了重大风险，导致DNA损伤的背景损害水平明显更高。我们的研究证明了了解pH对DNA稳定性的影响的重要性，并提供了对与碱性环境相关的风险的见解，尤其是在pH> 13。
碱性条件下的DNA完整性
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