在基因设计的大肠杆菌中生产N连接的糖蛋白具有降低成本，简化生物程序和增强定制的显着潜力。然而，建造稳定和低成本的微生物细胞工厂，用于人性化的N-糖基化重组蛋白的有效产生仍然是一个巨大的挑战。In this study, we developed a glyco-engineered E. coli chassis to produce N -glycosylated proteins with the human-like glycan Gal- β -1,4-GlcNAc- β -1,3-Gal- β -1,3- GlcNAc-, containing the human glycoform Gal- β -1,4-GlcNAc- β -1,3-.我们最初的努力是用寡素胆汁含量pGLB和糖基转移酶LSGCDEF替换大肠杆菌XL1-蓝色菌株的基因组中的各种基因座，以构建大肠杆菌。此外，我们系统地优化了基因组中的启动子区域以调节转录水平。随后，利用带有靶蛋白的质粒，我们成功地获得了N-糖基化蛋白，其含量约为320 mg/L，其产量为100％四糖修饰。此外，我们使用含有质粒的质粒构建了代谢途径，该质粒含有靶蛋白的双表达盒和四糖底盘细胞中的CMP-Sialic酸合成，从而导致终端α-2,3- siAia llyag-65 miAia saimia saiia saimiA siaiia saimiA siaia saimia syaiia和65-My ly a f as 65 m s h 65 m s h 65 m s y 40％的功效糖蛋白会刺激。我们的发现铺平了进一步探索siAllated人类的n -like n-糖蛋白在插件大肠杆菌底盘中的含量中产生不同联系（α-2,3/α-2,6/α-2,8）的方式，为工业尺度生产奠定了基础。