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碱基编辑器 (BE) 是一种基因组编辑剂，可高效、特异地安装点突变。由于 BE 依赖于尿嘧啶和肌苷 DNA 损伤中间体（而不是双链 DNA 断裂或 DSB），因此有人推测 BE 依赖于比 DSB 依赖型基因组编辑方法更普遍的 DNA 修复途径，而 DSB 依赖型基因组编辑方法需要仅在细胞周期的某些阶段活跃的过程。我们在此报告了使用细胞同步实验对碱基编辑的细胞周期依赖性进行的首次系统研究。我们发现，切口酶衍生的 BE（在尿嘧啶或肌苷碱基对面引入 DNA 骨架切口）独立于细胞周期发挥作用，而非切口 BE 高度依赖于 S 期（DNA 合成期）。我们发现，胞嘧啶碱基编辑过程中 G1（生长期）的同步会导致 C • G 到 A • T“副产物”引入率显著增加，这可用于发现精确 C • G 到 A • T 碱基编辑的新策略。我们观察到 DNA 损伤修复途径的内源表达水平足以将碱基编辑中间体加工成所需的编辑结果，并且碱基编辑过程不会显著扰乱转录水平。总体而言，我们的研究提供了机制数据，证明了切口酶衍生的 BE 在整个细胞周期内进行基因组编辑的稳健性。
加州大学圣地亚哥分校
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