1) 将大肠杆菌培养液(高拷贝质粒:2-10 ml)离心(12,000 x g,30秒),弃上清,得到沉淀。 ↓ ②加入150 μl A1 buffer(加RNase A),涡旋悬浮细胞。 ↓ ③加入250μl A2缓冲液,颠倒混合5次左右,静置2分钟。 [裂解] ↓ ④ 加入350 μl A3缓冲液,颠倒混匀,直至液体由蓝色变为完全无色。检查是否没有蓝色残留,然后离心(12,000 x g,3 分钟)。 ↓ ⑤将上清液转移到NucleoSpin® Plasmid EasyPure 柱中,离心(1,000-2,000 × g,30 秒)。 [结合] ↓ ⑥ 加入450 μl AQ缓冲液(+EtOH)并离心(12,000 × g,1分钟)。 [洗涤/干燥] ↓ ⑦向柱中加入50 μl AE缓冲液,室温下放置1分钟。 ↓ ⑧ 离心(12,000×g,1分钟)回收质粒溶液。 [洗脱]