SLC16A2-G401R和基因敲除(KO)细胞系是通过转染重组Cas9蛋白和(G401 MUT)的合成GRNA或没有SSODN的HIPSC系列而产生的,从健康的供体(Bibhi001-b)中产生的HIPSC系。使用单个GRNA靶向外显子3生成了两种修饰(图1 A,表2)。SLC16A2-G401R Mu tation是通过使用SSODN模板通过同源性修复(HDR)引入的(图1 A,表2)。SSODN模板包括在AHDS患者中发现的突变:C.1201G> A,静音突变,以破坏PAM序列:C.1200C> T和4个无声突变,以破坏种子序列(C.1185C> T,C.1186C> A,C.1188C> A,C.1188C> A,C.1191C> a,C.1191c>1 a和f)。使用了相同的GRNA指南,并选择了带有框架移动的克隆,从而选择了过早的停止密码子。在两个报道的KO细胞系中(BIHI001-B-7和 - 8)
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