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我们构建了一组质粒,可用于在某些革兰氏阴性细菌中表达重新组合功能,从而促进体内遗传操作。这些质粒包括复制的起源和噬菌体λ基因组的片段,该基因组在其天然控制下包含红色基因(EXO,BET和GAM)。这些构建体不需要通常需要的抗终止事件才能进行红色表达,从而使它们在不同物种中的应用更可能。一些质粒具有温度敏感的复制子来简化固化。在创建这些向量时,我们开发了两个有用的重组应用程序。仅使用质粒起源和靶同源性,可以通过GAP-REPAIR检索任何与药物标记相关的基因。复制的质粒起源可以通过靶向替换来更改为不同的来源,从而有可能更改其拷贝数和主机范围。这两种技术都将被证明可用于操纵体内质粒。大多数红色质粒构造在大肠杆菌中催化有效的重组,其背景重组水平较低。这些红色质粒已在沙门氏菌中成功进行了测试,我们预计它们将在其他相关的革兰氏阴性细菌中提供有效的重组。由Elsevier B.V.

革兰氏阴性细菌的一组重组质粒

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