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本质上，一些蛋白质自发地在活细胞中结晶。这些晶体具有生物学功能，例如蛋白质储存，病毒保护，异质催化和免疫系统激活[1,2]。由于Polyhedra的结构（其中一种细胞蛋白晶体）在2007年确定[3] [3]，因此，在下一代结构生物学工具中引起了人们的注意，因为它不需要多步纯化过程或大规模结晶筛选。已经开发了几种ICPC方法，包括高通量筛选和细胞培养过程的优化。然而，在获得ICPC结构的各种蛋白质晶体方面仍有待解决的重大问题尚待解决，因为晶体通常在细胞中偶然形成。因此，将这种方法应用于蛋白质结构分析时必须克服几种技术挑战。如果可以建立一种新的ICPC方法，则预计它将成为一种更容易访问的结构分析技术。无细胞蛋白合成（CFP）是一种用于合成生物学的蛋白质制备技术，非常有效地筛选蛋白质合成[4]。但是，它被认为不适合需要大量蛋白质（例如结晶）的结构生物学工作。在这里，我们报告了使用CFPS的直接蛋白质结晶方法的无细胞蛋白质结晶（CFPC）的发展[5]。翻译反应是通过双层法进行的。1（a））。1（b））。我们（1）使用CFPS建立了小规模和快速结晶，（2）通过添加化学试剂来操纵结晶。通过用细胞质多角质病毒（CPV）感染在昆虫细胞中产生的多面体晶体（PHC）是研究最多的细胞内蛋白质晶体之一。CFPC的最关键优势是可以将反应量表和时间最小化，并且可以在反应过程中添加各种试剂。使用小麦生殖蛋白合成试剂盒（WEPRO7240表达试剂盒）进行多面体单体（PHM）的结晶，因为这些提取物已被鉴定为真核系统中蛋白质表达的最高蛋白表达活性。将含有10 m L的WEPRO7240和10 m m的mRNA溶液的20 m L反应混合物放在1.5 mL微管中，用200 m l亚amix SGC溶液覆盖，并在20°C下孵育24小时（图离心反应混合物，并收集白色沉淀（图结晶
无细胞的蛋白质结晶用于结构分析
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