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实时 TaqMan PCR 及其在兽医学中的应用 Christian M. Leutenegger 加利福尼亚大学医学和流行病学系，美国加利福尼亚州戴维斯 95616。简介 聚合酶链式反应 (PCR) 于 1985 年首次描述，是一种用于检测核酸的高灵敏度和特异性技术 [55]。该技术的发明者因其成就获得了诺贝尔奖 [43,44]，该成就彻底改变了研究和诊断的可能性。定性 PCR 是一种成熟且简单的技术，但对样本中存在的特定核酸进行量化是一项艰巨的任务。样品制备、储存或反应过程中可能发生的许多变化阻碍了准确的定量。反应条件中的微小变化也会因 PCR 扩增的指数性质而大大放大。可以通过将特定模板的 PCR 产物量相对于内部参考模板进行标准化来部分克服这些变化。考虑到已发表的数百篇关于定量 PCR 使用的论文，存在各种各样的协议也就不足为奇了。这些方法几乎仅限于研究使用，因为它们有两个共同点：难以执行且运行成本高昂。为满足更快、更准确、更经济且具有高通量能力的系统的需求，三个关键词对于下一代 PCR 系统的开发变得非常重要：自动化、标准化和小型化。通过将计算机辅助 PCR 与激光技术相结合，开发过程得到了加速，因此现在借助所谓的 TaqMan 探针对 PCR 产物进行激光引导检测，以及每个 PCR 循环的荧光数据点的实时积累几乎取代了耗时的后扩增步骤。此外，使用国际标准化的 96 孔微量滴定板格式可以在几个小时内筛选大量样本。TaqMan 原理在 Applied Biosystems (ABI) 棱镜序列检测设备（Applied Biosystems，美国加利福尼亚州福斯特城）中实现，这是目前最先进的技术之一，为进一步开发提供了独特的平台。
实时 TaqMan PCR 及其在兽医学中的应用...
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